[发明专利]稻瘟病菌无毒基因Avr-Pit分子标记无效
| 申请号： | 201210242542.0 | 申请日： | 2010-10-14 |
| 公开（公告）号： | CN102766691A | 公开（公告）日： | 2012-11-07 |
| 发明（设计）人： | 张正光;董妍涵;王源超;郑小波;董莎萌 | 申请（专利权）人： | 南京农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京知本村知识产权代理事务所 11039 | 代理人： | 刘江良 |
| 地址： | 21009*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 稻瘟病 无毒 基因 avr pit 分子 标记 | ||
【权利要求书】：
1.一种检测稻瘟病菌无毒基因Avr-Pit的分子标记引物，其特征在于：其上游引物序列如SEQ ID No.3所述，下游引物序列如SEQ ID No.4所述。
2.一种稻瘟病菌无毒基因Avr-Pit的分子标记检测方法，其特征在于：利用权利要求2所述的引物扩增待测稻瘟病菌基因组DNA，取扩增产物用酶PciI进行酶切，然后对酶切片段进行凝胶电泳，若出现两条长度分别为472bp和382bp的片段，则待测稻瘟病菌基因组含有无毒基因Avr-Pit。
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于：PciI酶切体系为：10×3 buffer 2.0 μl，DNA 0.5 μg，100×BSA 0.2 μl，PciI酶0.5 μl，加无菌超纯水至20 μl。
4.根据权利要求2或3任一项所述的检测方法，其特征在于：扩增待测稻瘟病菌基因组DNA的PCR反应体系为：10×Ex Taq buffer 5.0 μl，MgCl2 2 mM，dNTPs 0.2 mM，Ex Taq DNA聚合酶1.25 U，上、下引物各为0.5 μM，模板DNA 2.5 ng，加无菌超纯水至50 μl；PCR反应参数为：94℃预变性5 min； 94 ℃变性30 S, 57℃退火30 S,72 ℃延伸1 min, 31个循环；72 ℃延伸8 min。
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