[发明专利]核酸的扩增检测方法以及试剂盒

权利要求书

1.一种对试样中所含的核酸进行扩增的方法，该方法包括：

(a)将用于对该核酸的任意区域进行扩增的引物、聚合酶、以及作为核酸扩增底物的核苷酸，与含有该核酸的试样混合的工序；以及

(b)利用聚合酶反应对该区域进行扩增的工序，

其中，该聚合酶具有由序列编号1构成的氨基酸序列或者与序列编号1同源的氨基酸序列，并且对应于该氨基酸序列的653位的氨基酸残基被谷氨酸取代。

2.一种对试样中所含的核酸进行扩增并检测的方法，该方法包括：

(a)将用于对该核酸的任意区域进行扩增的引物、聚合酶、作为核酸扩增底物的核苷酸、以及用于检测所扩增的核酸的探针，与含有该核酸的试样混合的工序；

(b)利用聚合酶反应对该区域进行扩增的工序；以及

(c)使用该探针检测该区域的工序，

其中，该聚合酶具有由序列编号1构成的氨基酸序列或者与序列编号1同源的氨基酸序列，并且对应于该氨基酸序列的653位的氨基酸残基被谷氨酸取代。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述(c)的检测工序通过扩增反应中蓄积的PCR产物的检测或者熔解曲线分析而进行。

4.根据权利要求1至3中任意一项所述的方法，其中，所述进行扩增的核酸为DNA或RNA。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述(b)的扩增工序为PCR或RT-PCR。

6.根据权利要求1至5中任意一项所述的方法，其中，所述作为核酸扩增底物的核苷酸含有脱氧尿苷三磷酸。

7.根据权利要求1至6中任意一项所述的方法，其中，所述聚合酶是，为使5’→3’核酸外切酶活性缺失或降低而使N末端的氨基酸缺失的改性Tth聚合酶。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述聚合酶为序列编号1的氨基酸序列中的第1～77位的氨基酸缺失的改性Tth聚合酶。

9.根据权利要求7所述的方法，其中，所述聚合酶为序列编号1的氨基酸序列中的第1～291位的氨基酸缺失的改性Tth聚合酶。

10.根据权利要求1至9中任意一项所述的方法，其中，所述(b)工序为在20个碱基以上/秒的条件下对核酸进行扩增的工序。

11.根据权利要求10所述的方法，其中，所述(b)工序为扩增600个碱基以上的碱基长度的工序。

12.一种试剂盒，其用于对试样中所含的核酸进行扩增，该试剂盒含有：用于对任意的核酸区域进行扩增的引物、聚合酶、以及作为核酸扩增底物的核苷酸，其中，

该聚合酶具有由序列编号1构成的氨基酸序列或者与序列编号1同源的氨基酸序列，并且对应于该氨基酸序列的653位的氨基酸残基被谷氨酸取代。

13.一种试剂盒，其用于对试样中所含的核酸进行扩增并检测，该试剂盒含有：用于对任意的核酸区域进行扩增的引物、聚合酶、作为核酸扩增底物的核苷酸、以及对所扩增的核酸进行检测的探针，其中，

该聚合酶具有由序列编号1构成的氨基酸序列或者与序列编号1同源的氨基酸序列，并且对应于该氨基酸序列的653位的氨基酸残基被谷氨酸取代。

14.根据权利要求12或13所述的试剂盒，其中，所述作为核酸扩增底物的核苷酸含有脱氧尿苷三磷酸。