[发明专利]快速获得葡萄松散型愈伤组织及其长期继代保持的方法

权利要求书

1.一种快速获得葡萄松散型愈伤组织的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：

（1）葡萄无菌株系的获得：选取经预处理后的当年生无病葡萄枝条的带节茎段，之后将所选取的带节茎段接种到附加0.1mg/L NAA的1/2MS培养基上诱导产生葡萄无菌株系；其中预处理包含清洗、风干表面水分，并杀菌消毒；

（2）启动培养：取步骤（1）所获得的葡萄无菌株系的小苗，切取0.5cm茎段或切取0.5cm×0.5cm见方大小的叶片作为外植体，接着将该外植体接种至诱导愈伤组织的培养基中，并将该培养置基于培养室中培养，7天后可见愈伤组织形成，25~30天后长成初代愈伤组织；

（3）制备葡萄松散型愈伤组织：将步骤（2）培养得到的初代愈伤组织转接到继代增殖培养基中，并将该继代增殖培养基置于培养室中进行继代增殖培养，以获得葡萄松散型愈伤组织；

其中，步骤（2）与步骤（3）中所述培养室中的条件均为：温度设置23~25℃，光照强度1500~2000lx，每天光照12h。

2.根据权利要求1所述的快速获得葡萄松散型愈伤组织的方法，其特征在于：步骤（2）中所述诱导愈伤组织的培养基为：MS+BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉6g/L。

3.根据权利要求1所述的快速获得葡萄松散型愈伤组织的方法，其特征在于：步骤（3）中所述继代增殖培养基为：MS+2,4-D 1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉6g/L。

4.一种葡萄松散型愈伤组织长期继代保持的方法，其特征在于：其操作如下：取权利要求1所获得的葡萄松散型愈伤组织，并接于第一种培养基中继代保持至少2代后，转接到第二种培养基中继代保持1代，如此反复交替继代培养，即可长期继代保持葡萄松散型愈伤组织，且继代保持时的该第一种培养基、第二种培养基均置于培养室中进行；其中，所述第一种培养基为：MS+2,4-D 1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉6g/L；所述第二种培养基为：MS+2,4-D 1.0mg/L+KT 0.5mg/L+AgNO₃ 5.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉6g/L；所述培养室中的条件为：温度设置23~25℃，光照强度1500~2000lx，每天光照12h。