[发明专利]一种检测肿瘤细胞EGFR基因突变的方法及芯片

权利要求书

1.一种检测肿瘤细胞EGFR基因突变的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、以SEQ ID NO:1-8所示序列为引物、肿瘤细胞DNA为模板进行PCR扩增，获得扩增产物，其中SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8所示序列的5＇端均修饰有生物素；

步骤2、SEQ ID NO:9-24所示序列的探针分别与步骤1所得扩增产物杂交，然后洗涤除去未结合的扩增产物，最后与偶联金纳米微粒的链亲和素孵育，根据金纳米微粒颜色变化判断突变结果。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述PCR为多重PCR或非对称PCR。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述杂交的DNA用量至少为10ng。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述探针的工作浓度为10-400nmol/L。

5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，还包括：

在与偶联金纳米微粒的链亲和素孵育的步骤后用银染法增强信号步骤。

6.一种检测肿瘤细胞EGFR基因突变的芯片，其特征在于，包括：

SEQ ID NO:1-8所示序列的扩增引物、固定有SEQ ID NO:9-24所示序列的探针的片基、偶联金纳米微粒的链亲和素；

其中，SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8所示序列的5＇端均修饰有生物素。

7.根据权利要求6所述芯片，其特征在于，所述固定通过在所述探针的5＇端修饰氨基，然后与醛基化的片基结合实现。

8.根据权利要求6所述芯片，其特征在于，所述探针的工作浓度为10-400nmol/L。

9.根据权利要求6所述芯片，其特征在于，还包括杂交液，所述杂交液以质量百分数计，包括4.38%氯化钠、2.205%柠檬酸钠、0.2%SDS、50%甲酰胺，余量为水。

10.根据权利要求6所述芯片，其特征在于，还包括硝酸银染液，所述硝酸银染液以质量百分数计，包括0.6%明胶、2.55%柠檬酸、2.35%柠檬酸钠、1.7%氢醌和0.3%硝酸银，余量为水。