[发明专利]一种从燕窝中提取牛磺酸的方法及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从燕窝中提取牛磺酸的方法及其检测方法。

背景技术

燕窝是一种名贵的传统中药和保健食品，来源于雨燕科动物金丝燕及多种同属燕类用唾液与绒羽等混合凝结所筑成的巢窝。在《本草纲目》上对燕窝的药用价值的，评价为：味甘淡平，大养肺阴，化痰止嗽，补而能清，为调理虚损劳瘵之圣药。一切病之由于肺虚不能清肃下行者，用此皆可治之；开胃气，已劳痢，益小儿痘疹，可入煎药，或单煮汁服。燕窝的产地主要是马来西亚和印尼，因为燕窝的产量少，药用价值高，加上燕窝的价格昂贵。市面上很多不法商贩，利用不同的原料，进行添加和造假燕窝。检测氨基酸的含量作为真假燕窝的依据受到大多数商家认可。目前现有技术中尚无一种行之有效的检测方法。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了一种从燕窝中提取牛磺酸的方法及其检测方法。本发明检测燕窝中牛磺酸的含量，作为检测真假燕窝的指标之一，操作简单，快速，准确，可靠。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种从燕窝中提取牛磺酸的方法，步骤如下：

（1）取燕窝，粉碎，按燕窝（W）：水（V）=1：3～9（单位g：ml）的比例加入水，在常温下超声（40MHz）提取1～3次，每次时间为30～60分钟，提取之后进行离心（9000rpm，10分钟），合并上清液；

（2）向上述离心好的上清液中按上清液（W）：无水乙醇（V）=3：5～7（单位g：ml）的比例加入无水乙醇，在闭光的容器内放置0.5～1小时，然后取出上清液（直接倒出或虹吸或过滤）；

（3）上述上清液在50～65℃条件下旋转蒸发浓缩，得到浓缩液，干燥后即得到含牛磺酸的粉末状物质。

一种牛磺酸的薄层层析检测方法，步骤如下：

（1）取样品液（即上述步骤（3）得到的浓缩液）10μl点在涂有硅胶GF₂₅₄的高效薄层板（10cm×10cm）上，以正丙醇（v）：无水乙醇（v）：水（v）：冰乙酸（v）=5～7：0.5～1：1～2：1～2作为展开剂，在展开缸（10cm×12cm×15cm）内展开，展距为6cm，并采用外标一点法点1μl（0.12，0.192，0.24，0.36，0.48mg／ml）牛磺酸标准品溶液，同时展开，展开的时间为60分钟，展开的距离为6cm；

（2）展完后取出展板晾干，以质量浓度为1～2％的水合茚三酮的乙醇溶液为染色液喷雾染色在板上，放进烘箱里烘干5分钟，温度为110℃，其R_f=0.62。

（3）将烘干后的展板放在薄层扫描仪上，以485nm吸收波长进行扫描，通过检测样品和标准品的吸光度并计算得到燕窝中牛磺酸的含量。

上述检测方法，还需要进行以下辅助工作：绘制标准曲线：

取Sigma公司销售的牛磺酸标准品溶解于水，其浓度分别为0.12，0.192，0.24，0.36，0.48mg／ml，在高效薄层板上各点1μl，用Camag薄层扫描仪3，以485nm的吸收波长扫描，经扫描仪的软件Wincats1.4.1统计，得到的线性方程Y=4234.5154+20.6178X，相关系数r=0.99928，RSD=1.87％。

经多次检测和计算，真品燕窝中的牛磺酸含量为12.620～12.720μg／g。

本发明的牛磺酸的薄层层析检测方法，其精确度、板内变异、板间变异、加样回收率等情况如下：

1.精确度的测定

制备0.24mg／ml牛磺酸标准溶液，在同一块高效薄层板上点四个点，每点为1μl，分别在0，2，4，6和8小时扫描测量，证明了4小时后才稳定，如表1所示。

2.板内变异和板间变异

在板上分别滴1μl即0.24mg／ml和0.48mg／ml标准品溶液每隔12小时扫描定量，共测定2天。测得板内变异为0.94％～2.45％，而板间变异为0.33％～2.78％，如表2所示。

3.加样回收率

向提取配制的样品液中，加50，100和150％的牛磺酸标准品，其加样平均回收率为99.68％，如表3所示。

表1精确度

表2板内变异和板间变异

表3加样回收率