[发明专利]一种从南极磷虾中提取生物素的方法及高效薄层扫描分析方法

权利要求书

1.一种检测生物素的高效薄层扫描分析方法，其特征在于：步骤如下：

(1)取待检测样品液4μL，点在涂有硅胶GF254高效薄层板上，以体积比二氯甲烷：异 丙醇：甲醇：冰乙酸＝1～3：1～3：2～3：0.01～0.15作为展开剂，在展开缸内展开，展 距为6cm，并采用外标一点法点1μL生物素标准品溶液，同时展开，展开的时间为40分钟， 展开的距离为6cm，然后晾干；

(2)将2,4-二甲氨基肉桂醛、浓硫酸和无水乙醇混合，配成染色液，其中2,4-二甲氨基 肉桂醛终浓度为0.1～0.2％，硫酸终浓度为10～20％；展完后晾干的展板，用染色液喷雾染色， 将板放进通风橱5分钟后，喷上10％的石蜡氯仿溶液；冷却后放入Camag薄层扫描仪-Ⅲ扫描， 扫描波长为530nm，通过检测样品和标准品对紫外线的吸光度并计算得到生物素的含量；

步骤(1)中，生物素标准品溶液的浓度分别为0.19mg/mL、0.3mg/mL、0.66mg/mL、1.28mg/mL 和3.31mg/mL；

所述样品液是通过以下方法制备得到的：

(1)取1公斤冷冻的南极磷虾，在40～60℃烘干，然后加入3～9升的氯仿，在常温下 搅拌提取1～3次，每次时间为30～60分钟，过滤得处理虾粉；

(2)将上述得到的处理虾粉按虾粉：二甲基甲酰胺＝1g：25～40mL的比例加入二甲基甲 酰胺，在75～95℃水浴上搅拌提取1～2小时，得提取液；

(3)上述得到的提取液在10,000rpm下离心10分钟，取上清液，向上清液中加入等体 积量的乙醇，50～65℃下旋转蒸发浓缩，得浓缩液，即为含有生物素的样品液。