[发明专利]一种枯草芽孢杆菌菌株A97、菌剂及制备方法和应用

权利要求书

1.一种枯草芽孢杆菌菌株A97（Bacillus subtilis A97），保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.5840。

2.一种微生物菌剂，其特征在于，活性成分为权利要求1所述的枯草芽孢杆菌A97菌体及其胞外代谢产物。

3.按照权利要求2所述的微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂为液态菌剂。

4.一种权利要求2或3所述微生物菌剂的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

步骤1、菌种活化：

将低温保存的枯草芽孢杆菌菌株A97接种在营养琼脂平板培养基上进行活化培养，在28℃～33℃下培养20～24小时；然后挑取单菌落接种于营养琼脂斜面培养基上进行扩增培养，在28℃～33℃下培养20～24小时；再用无菌水将菌体洗脱，获得的洗脱液作为种子培养的接种液；

步骤2、种子液的制备：

在经过高压湿热灭菌的种子培养基中接入步骤1得到的接种液，所用种子培养基和接种液的体积比为1：0.1%～1：1%，在28℃～33℃且初始pH值为7.0～8.0的条件下震荡培养12～16小时，得到种子液；

步骤3、发酵培养：

将步骤2得到的种子液接入发酵培养基中，所用发酵培养基和种子液的体积比为1：1%～1：10%，在28℃～33℃且初始pH值在7.0～8.0条件下进行搅拌状态下的液体发酵，直至发酵液中芽孢产生率不小于90%且菌体浓度不低于10¹⁰CFU/ml；

步骤4、液体菌剂制备：

将步骤3得到的发酵液与添加剂混匀溶解后制成微生物菌剂，所用添加剂及其分别与发酵液的比例为：几丁质0.1%～0.5%Kg/L，普鲁兰多糖0.5%～5%Kg/L，羧甲基纤维素钠0.5%～2%Kg/L，CaCl₂0.5%～3%Kg/L。

5.按照权利要求4所述的微生物菌剂制备方法，其特征在于，步骤2中，所用种子培养基的组分及其质量百分比为：葡萄糖2%～4%，可溶性淀粉2%～4%，蛋白胨2%～5%，NaCl 0.3%～0.5%，CaCO₃0.01%～0.03%，MgSO₄·7H₂O 0.02%～0.04%，余量为水，以上各组分的重量百分比总和为100%。

6.按照权利要求4所述的微生物菌剂制备方法，其特征在于，步骤3中，所用发酵培养基的组分及其质量百分比为：玉米粉2%～4%，豆饼粉2%～4%，鱼骨粉0.5%～1%，NaCl 0.3%～0.5%，KH₂PO₄0.01%～0.03%，MgSO₄·7H₂O 0.02%～0.04%，余量为水，以上各组分的重量百分比总和为100%。

7.按照权利要求4所述的微生物菌剂制备方法，其特征在于，步骤4中，所用几丁质、普鲁兰多糖、羧甲基纤维素钠以及CaCl₂均为食品级。

8.权利要求2所述的微生物菌剂的使用方法，其特征在于，将微生物菌剂按1：10～1：100的体积比例用水稀释，然后将稀释后的液体微生物菌剂于果实采收前进行喷雾，或在果实采收分拣后浸果处理1min～3min。

9.权利要求2所述的微生物菌剂在防治果蔬采后病害上的应用。