[发明专利]甜瓜抗蔓枯病聚合基因的鉴定

说明书

一、技术领域

本发明公开了甜瓜抗蔓枯病聚合基因鉴定的方法，专用于甜瓜抗蔓枯病聚合育种及分子标记辅助选择，有利于开展甜瓜蔓枯病抗病品种的选育与种质资源的创制，属于植物生物技术领域。 

二、技术背景

在甜瓜抗蔓枯病研究领域，国际上发现含有不同抗性基因的5份抗源材料PI140471、PI157082、PI511890、PI482398和PI482399，其抗性基因分别命名为Gsb-1、Gsb-2、Gsb-3、Gsb-4和Gsb-5。PI420145是最新筛选出的蔓枯病抗源，通过遗传分析，该抗源的抗性基因也为单显性。这6份抗源的蔓枯病抗性均由单个基因控制，但是随着栽培环境的和病原物致病性的改变，携带单个抗蔓枯病基因的抗源已不能提供足够的、稳定的抗病性。多个抗性基因聚合后，并不简单的表现为单个抗病基因的抗谱之间的简单累加，而是抗性基因之间表现为基因互作，这样能够扩大抗谱，增加抗源的抗性。因此，在进行甜瓜蔓枯病抗性育种时将多个抗蔓枯病基因同时导入改良亲本，是获得持久、高抗蔓枯病甜瓜品种的重要途径之一。 

可通过两份抗蔓枯病材料常规杂交将抗性基因聚合到一份抗源中、连续自交多代稳定抗性，实现抗蔓枯病基因的聚合。在聚合的过程中，运用表型结合分子标记技术辅助选择，分子标记辅助选择通过分析与目标基因紧密连锁的分子标记鉴别目标基因是否存在，不受基因表达、环境条件及植株生长发育阶段的影响，也不受杂交方式的影响，在植株的苗期或低世代就可进行筛选，可以缩短选择年限，提高育种效率。 

三、发明内容

技术问题 

本发明甜瓜蔓枯病抗性基因聚合鉴定，目的是针对单一抗源抗性基因抗性不足，不持久等缺点，发掘出甜瓜蔓枯病聚合抗病基因资源，为甜瓜的蔓枯病抗病育种提供基因资源和标记辅助选择的技术，从而大大提高选择效率。将不同的抗性基因聚合在同一品种中可以提高抗性，拓宽抗谱，达到持久抗性的目的，加快培育优良抗蔓枯病甜瓜品系的进程。 

技术方案 

以抗蔓枯病材料PI 420145作为母本，与另一抗蔓枯病材料PI482398进行杂交，得到F₁，F₁自交，每代经蔓枯病菌抗性鉴定选出抗蔓枯病植株连续自交三代得到F₄，F₄经人工接种抗性鉴定，筛选抗蔓枯病遗传稳定的植株。 

对F₄抗蔓枯病甜瓜植株进行抗性基因鉴定。用3个AFLP分子标记对抗病材料PI420145、 感病材料白皮脆以及40份F₄材料进行PCR扩增，结果表明，PI420145和40份F₄材料中在200、90、60bp处均扩增出一条特异条带，与这3个引物在抗病材料PI420145上扩增的特异的条带完全完全一致，表明F₄含有PI420145的抗蔓枯病基因，感病对照白皮脆未检测出该特异条带。用SSR标记CMAT170a对抗病材料PI482398、感病材料白皮脆以及40份F₄材料进行PCR扩增，PI482398和40份F₄材料在120bp处均扩增出一条特异条带，与该引物在抗病材料PI482398上扩增的特异条带一致，表明F₄含有抗蔓枯病基因Gsb-4，感病对照白皮脆未检测出这些条带。则这40份F₄材料聚合了PI420145和PI482398抗蔓枯病基因。 

有益效果 

本发明所提供的甜瓜抗蔓枯病基因聚合方法及其鉴定具有以下优点： 

1)本发明通过2个甜瓜抗蔓枯病材料PI420145和PI 482398杂交和连续自交三代，得到F₄，获得甜瓜2个抗蔓枯病基因聚合的材料，其抗性稳定，且抗性大于单一抗源。 

2)本发明创制的甜瓜抗蔓枯病基因聚合材料F₄，可作为抗性亲本进行抗病育种，通过与性状优良的商品种杂交、回交，获得抗蔓枯病的优异甜瓜品种。对甜瓜抗蔓枯病育种及种质创新具有重要意义。 

四、附图说明

图1：SSR引物CMAT170a在抗源PI482398、白皮脆和聚合抗源后代F4上扩增的结果：表明聚合抗源后代F4中含有抗源PI482398的抗蔓枯病基因。 

其中，M：Marker，1：抗蔓枯病单株PI482398，2：感蔓枯病单株白皮脆，3：聚合抗源PI420145×PI482398。箭头示为出现的特异带。