[发明专利]一株具有百草枯抗性的硝化还原假单胞杆菌

权利要求书

1.一株对百草枯具有抗性的硝化还原假单胞杆菌（Pseudomonas nitroredu-cens）菌株S3，它的保藏号为CGMCC6300。

2.一种植物表达载体pCAMBIA2301-PnPQR，其特征在于通过下述方法制备：

（1）从硝化还原假单胞杆菌（Pseudomonas nitroreducens）CGMCC 6300中分离百草枯抗性基因PnPQR：

以P1：5'-CCACTCCGATGTCCAATC-3'和P2：5'-TTACCCGCTCGTCCCTAT-3′为引物，通过PCR从硝化还原假单胞杆菌（Pseudomonas nitroreducens）CGMCC 6300中分离序列如SEQ ID NO.1所示的目标基因PnPQR，将PnPQ连接到pMD18-T载体中，构成pMD-PnPQR载体；

（2）pCAMBIA2301载体启动子和终止子的添加

以pBI121为模板，应用引物35SF：5'-GAATTCGATTAGCCTTTTCAATTTCAG-3′和35SR：5'-GAGCTCAGGAAGTTCATTTCATTTGGAG-3'，扩增CaM35S启动子片段；用EcoRⅠ和SacI对PCR产物和pCAMBIA2301同时进行双酶切，用T4 ligase连接成pCAMBIA2301-35S；再以pBI121为模板，用引物NOSF：5'-GCATGCATCGTTCAAACATTTGGCAATAA-3'和NOSR：5'-GANTCGATCTAGTAACATAGATGACACCGC-3'，扩增NOS终止子片段，再用SphⅠ和HindIII对PCR产物和pCAMBIA2301-35S-NOS同时进行双酶切，用T4 ligase连接成pCAMBIA2301-35S-NOS；

（3）pCAMBIA2301-PnPQR植物表达载体的构建

以pMD-PnPQR为模板P3：5'-GAAGGATCCTCCACTCCG ATGTCCAATC-3'和P4：5'-CTAGAGCTCTTACCCGCTCGTCCCTAT-3′为引物，扩增包括PnPQR编码区全长片段，用BamHI和SacI对PCR产物和pCAMBIA2301-35S-NOS载体同时进行双酶切，用T4 ligase连接成pCAMBIA2301-PnPQR。