[发明专利]人工条件下黑尾叶蝉获得水稻矮缩病毒的方法及其应用

权利要求书

1. 一种人工饲喂条件下黑尾叶蝉获得水稻矮缩病毒的方法，其特征在于包括如下步骤：

1）黑尾叶蝉的获得：

从非水稻矮缩病发生地区的水稻田间采集捕获黑尾叶蝉后在室内用无毒稻苗饲养，待黑尾叶蝉成虫交配后单头虫单独产卵，随机抽取群体中10%的黑尾叶蝉用RT-PCR方法检测带毒情况，保留不带毒雌虫的后代并建立室内种群；

2）黑尾叶蝉的获毒：

黑尾叶蝉从冷冻保存的感染RDV水稻或活的感病水稻病株中获毒：

饲毒前，黑尾叶蝉在滤纸保湿的烧杯中饥饿1～3小时；从-10℃至-80℃保存冰箱中取出冷冻保存的病株，移入烧杯内，每个烧杯放1～10株病株；接入20～300头3～4龄无毒的黑尾叶蝉若虫，烧杯用尼龙纱布封口；把烧杯放入温室或植物生长箱内饲养，温度为26～30℃，相对湿度为60 %～75 %，光周期为16L：8D；饲毒1～2天后将存活的黑尾叶蝉移入生长于温室或植物生长箱的健康水稻苗上喂养，温度为26～30℃，相对湿度为60 %～75 %，光周期为16L：8D，直至渡过病毒的循回期，约15～20天；饲毒后的单头黑尾叶蝉在健康水稻上单独产卵，随机抽取其后代群体中10%的黑尾叶蝉用RT-PCR方法检测带毒情况，保留带毒雌虫的后代并建立室内带毒种群，即获得携带水稻矮缩病毒的黑尾叶蝉；

或者，黑尾叶蝉从种植于温室或植物生长箱内的水稻病株上获毒：  

饲毒前，黑尾叶蝉在滤纸保湿的烧杯中饥饿1～3小时；感染水稻矮缩病毒的水稻病株，用尼龙纱布封口的圆形开口塑料容器封闭在温湿度控制的植物生长箱中培养，每个塑料容器放1～3株病株植物；每个装置中放入20～200头3～4龄无毒的黑尾叶蝉若虫，饲喂培养温度为26～30℃，相对湿度为60 %～75 %，光周期为16L：8D；饲毒1～3天后将存活的黑尾叶蝉移入新鲜健康水稻苗上饲养直至渡过病毒的循回期，约15～20天；饲毒后的单头黑尾叶蝉在健康水稻上单独产卵，随机抽取其后代群体中10%的黑尾叶蝉用RT-PCR方法检测带毒情况，保留带毒雌虫的后代并建立室内带毒种群，即获得携带水稻矮缩病毒的黑尾叶蝉。

2.一种如权利要求1所述方法获得的携带水稻矮缩病毒的黑尾叶蝉的应用，其特征在于所述的携带水稻矮缩病毒的黑尾叶蝉用于饲喂健康水稻苗来鉴定水稻品种的抗性，用于筛选水稻的抗病品种，并为抗水稻矮缩病毒抗病育种服务。

3.如权利要求2所述的一种携带水稻矮缩病毒的黑尾叶蝉的应用，其特征在于所述的携带水稻矮缩病毒的黑尾叶蝉用于饲喂健康水稻苗来鉴定水稻品种抗性的方法为：将携带水稻矮缩病毒的黑尾叶蝉移入待鉴定的种植于温室或植物生长箱的2-5叶期水稻苗，采用单苗10头虫方法接种待鉴定水稻品种，饲养3-7天后移出全部黑尾叶蝉，将稻苗移栽至温室或植物生长箱内，培养温度为26-30℃，相对湿度为65 %-75 %，光周期为16L：8D；7天以后开始观察病毒症状，连续调查20-50天；用RT-PCR和dot-ELISA方法检测水稻；根据饲喂接毒水稻的病毒症状及其RT-PCR和dot-ELISA检测结果判断水稻的抗性。

4.一种如权利要求1所述方法获得的携带水稻矮缩病毒的黑尾叶蝉的应用，其特征在于所述的携带水稻矮缩病毒的黑尾叶蝉用于筛选抗水稻矮缩病毒特异、灵敏的单抗，从而建立以单抗为核心的检测水稻及黑尾叶蝉体内水稻矮缩病毒的血清学方法。

5.一种如权利要求1所述方法获得的携带水稻矮缩病毒的黑尾叶蝉的应用，其特征在于所述的携带水稻矮缩病毒的黑尾叶蝉用于研究水稻矮缩病毒与水稻寄主及其介体昆虫之间的互作机理提供物质基础。