[发明专利]一种快速的硫酸依替米星中控检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种硫酸依替米星生产过程中间控制的快速检测方法，具体涉及一种以耐受压力不低于600bar的液相色谱仪器与蒸发光检测器联用技术快速测定硫酸依替米星生产过程中的中间产品，达到对硫酸依替米星生产过程控制的目的。

背景技术

超高效液相色谱（UPLC）技术是随着waters公司2003年推出的采用小颗粒填料高压下运行的色谱仪Acquity UPLC而兴起的新的色谱分离技术。相较于高效液相色谱（HPLC）技术，它具有更高的柱效、更快的分离速度等优点，从而使分析技术跨入到高效、高通量时代。超高效液相色谱技术，采用亚2μm粒径的填料的色谱柱，精确梯度控制的超高压液相色谱泵，低扩散、低交叉污染的自动进样器及高速检测器，使UPLC的峰容量、分析效率、灵敏度都得到很大提高。

蒸发光散射检测（ELSD）技术兴起于上世纪80年代，是一种通用型检测器，不仅弥补了紫外检测器不能检测无紫外吸收或只有紫外末端吸收物质的缺陷，而且相较于用于无紫外吸收物质检测的示差折光检测器，它具有高灵敏度、不受温度等实验条件影响、可用于梯度洗脱等优点。ELSD由雾化器、加热漂移管、光散射池和散射光检测器组成，其工作原理主要包括雾化、蒸发、光散射及检测等3个过程。

硫酸依替米星(Etimicin sulfate)，结构式如下：

硫酸依替米星是我国科研人员自行研制的，拥有自主知识产权的高效、低毒、抗耐药菌的新一代半合成氨基糖苷类抗生素，是唯一获得国家一类新药证书的抗感染药物。本品适用于对其敏感的大肠埃希杆菌、克雷伯氏肺炎杆菌、沙雷氏杆菌属、枸橡酸杆菌、肠杆菌属、不动杆菌属、变形杆菌属、流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌和葡萄球菌等引起的各种感染。临床研究显示本品对以下感染有较好的疗效:呼吸道感染:如急性支气管炎、慢性支气管炎急性发作、社区肺部感染等。肾脏和泌尿生殖系统感染:如急性肾盂肾炎、膀胱炎、慢性肾盂肾炎或慢性膀胱炎急性发作等。皮肤软组织和其它感染:如皮肤及软组织感染、外伤、创伤和手术产后的感染及其他敏感菌感染。同时具有较低的耳、肾毒性不良反应发生率，证明了硫酸依替米星是临床应用中高效、安全的新一代半合成氨基糖苷类抗生素。硫酸依替米星由于无紫外生色基团，因此只具有很弱的紫外末端吸收，不能用紫外-可见光检测器直接测定，故本方法采用通用型检测器蒸发光散射检测技术。硫酸依替米星生产过程需要进行中控检测，目的是检测依替米星在分离纯化中的洗脱流分中依替米星含量，以监测硫酸依替米星的分离纯化过程，获得纯度较高的依替米星终产品。

中控检测是针对硫酸依替米星制备过程中的分离纯化过程的不同浓度乙醇解吸液，分离纯化后的含乙醇的依替米星解吸液的制备方法如下：取原料车间不同时间段收集的中间产品依替米星解吸液，以0.22μm滤膜过滤，即得。目前硫酸依替米星生产过程中控检测方法为柱前衍生化高效液相色谱法，由于衍生化反应复杂不可控、衍生化产物的不稳定性影响测定结果的准确性，同时检测时间至少要半个小时以上，严重影响了硫酸依替米星的生产效率。因此发明一种快速、准确的中控检测方法，对硫酸依替米星的生产和工艺开发都有非常积极的意义。

正是由于超高效液相色谱技术以及蒸发光散射技术满足我们对于硫酸依替米星测定要求，我们开发了硫酸依替米星UPLC-ELSD分析方法。

发明内容

本发明的目的是研究开发一种快速测定硫酸依替米星生产过程中分离纯化工序中的中控检测方法。

本发明的具体技术方案如下：

本发明提供一种硫酸依替米星检测方法，该方法采用超高效液相色谱法，同时使用蒸发光散射检测器实现快速检测。

本发明的检测方法，所用的色谱条件如下：

1、液相色谱仪耐受压力不低于600bar，仪器型号包括但不限于Waters H-Class或Agilent 1260或Agilnet 1290。

2、色谱柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶，粒径1.7~3.5μm，柱规格为50mm～150mm×1.0~4.6mm，柱孔径为80-120A°。

3、流动相分为有机相和水相，有机相为甲醇或乙腈，水相为水-氨水-冰醋酸混合溶液体积比范围为（88~98）:（1~5）：（0.1~1）。有机相与水相的体积比按时间顺序从20:80变化到90:10。

4、流动相流速为0.5~2ml/min，进样量为1μl~10μl。

5、检测器为蒸发光散射检测器，参数为漂移管温度为45~70℃，氮气流速1.5~3.0L/min，Gain值1~7。

本发明的检测方法，步骤如下：