[发明专利]一种制备浆细胞的方法及其得到的浆细胞

说明书

技术领域

本发明涉及一种制备浆细胞的方法及其得到的浆细胞。

背景技术

成熟B细胞接受抗原刺激后，在抗原递呈细胞和辅助性T细胞的辅助下成为活化的B细胞，进而分化为浆细胞，合成并分泌各类免疫球蛋白。

浆细胞及其分泌的抗体在保护性免疫、肿瘤和自身免疫性疾病的发生发展中发挥重要的作用。

目前，多从小鼠脾脏分离B细胞并用LPS体外刺激获得浆细胞，具有如下局限性：所需时间长，诱导过程中细胞死亡较多，生成的浆细胞分泌抗体能力一般。虽然可通过干扰抑制浆细胞分化的转录因子的表达来促进浆细胞分化，但并不能同时提高浆细胞的抗体分泌能力。

发明内容

本发明的目的是提供一种制备浆细胞的方法及其得到的浆细胞。

本发明提供了一种用B细胞制备浆细胞的方法，依次包括如下步骤：

（1）干扰离体的B细胞中MYSM1基因的表达；所述MYSM1基因为编码序列表的序列1所示蛋白质的基因；

（2）采用脂多糖(Lipopolysaccharide)诱导细胞分化为浆细胞。

所述MYSM1基因具体可为序列表的序列2所示的DNA分子或序列表的序列3所示的DNA分子。

所述步骤（1）中，所述“干扰B细胞中MYSM1基因的表达”的实现方式如下:在所述离体的B细胞中导入抑制所述MYSM1基因表达的物质。

所述“抑制所述MYSM1基因表达的物质”具体可为表达针对所述MYSM1基因的shRNA的重组慢病毒。

所述“在所述离体的B细胞中导入抑制所述MYSM1基因表达的物质”的实现方式具体如下：将所述重组慢病毒与所述离体的B细胞共培养。

所述重组慢病毒的制备方法可包括如下步骤：将重组质粒甲、质粒pMDLg/pRRE、质粒pRSV-Rev和质粒pMD2.G共转染哺乳动物细胞，培养细胞后得到重组慢病毒；所述重组质粒甲为含有DNA片段甲的质粒；所述DNA片段甲编码的RNA为具有沉默所述MYSM1基因的功能的shRNA。

所述DNA片段甲具体可如序列表的序列4所示。

所述重组质粒甲具体可为质粒pLKO.1-shmMysm1。

所述哺乳动物细胞具体可为293T/17细胞。

所述重组慢病毒具体可为LV-shmMysm1病毒。

所述LV-shmMysm1病毒的制备方法具体如下：培养293T/17细胞，待细胞达到85%融合时转染混合物甲，培养60-72小时后收取上清，即为LV-shmMysm1病毒液。

所述混合物甲的制备方法具体如下：将质粒pLKO.1-shmMysm1、质粒pMDLg/pRRE、质粒pRSV-Rev、质粒pMD2.G混合。

所述混合物甲的制备方法具体如下：将质粒pLKO.1-shmMysm1、质粒pMDLg/pRRE、质粒pRSV-Rev、质粒pMD2.G与转染试剂PEI混合。

所述质粒pLKO.1-shmMysm1即为Sigma公司Cat.No.TRCN0000085873的质粒产品。

所述混合物甲的制备方法具体如下：将质粒pLKO.1-shmMysm1 10ug、质粒pMDLg/pRRE 5ug、质粒pRSV-Rev 2.5ug、质粒pMD2.G 3ug与转染试剂PEI 80ug混合。

所述步骤（1）中，所述重组慢病毒的感染剂量具体可为MOI=5。

所述步骤（1）中，进行所述共培养时，还可加入辅助病毒感染的试剂，如Polybrene。所述Polybrene的加入量可为达到8ug/ml的浓度。

所述步骤（1）中，所述共培养的时间具体可为6小时。

所述步骤（1）中，所述共培养的温度具体可为37℃。

所述步骤（2）中，所述诱导细胞分化的时间可为2-4天。

所述步骤（2）中，所述诱导细胞分化的初始时刻，所述脂多糖的浓度具体可为20ug/ml。

所述离体的B细胞具体可为细胞表面标志物B220为阳性的细胞。

所述离体的B细胞可为离体的小鼠B细胞，如离体的C57BL/6小鼠B细胞。