[发明专利]检测牛凝血因子XI基因第9外显子内15bp插入突变的试剂盒

权利要求书

1.用于检测牛凝血因子XI基因第9外显子内15bp插入突变的PCR引物组合，其为：

引物对1：

a）上游引物wild-F 5’-CTGCTGTGCAGTGTTCTGCC-3’；

b）下游引物wild-R 5’-GGAGCGTCTATGGGACTTGA-3’；和

引物对2：

a′）上游引物mutant-F 5’-TGCAAGCCCTTTCTTCTGAT-3’；

b′）下游引物mutant-R 5’-AATGGCATATATTCTGCACA-3’。

2.含有权利要求1所述引物组合的检测牛凝血因子XI基因第9外显子内15bp插入突变的试剂盒。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括dNTPs、Taq DNA聚合酶、Mg²⁺、PCR反应缓冲液中的一种或多种。

4.根据权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括标准阳性模板。

5.权利要求1所述引物组合或权利要求2-4任一项所述试剂盒在检测牛凝血因子XI基因第9外显子内15bp插入突变中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

1）提取待测牛的基因组DNA；

2）以步骤1）中提取的DNA为模板，分别采用引物对1和引物对2，进行PCR扩增反应；

3）分析PCR产物。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，步骤3）具体为：

扩增反应结束后，将分别用引物对1和引物对2扩增的产物混合，进行琼脂糖凝胶电泳，根据电泳检测结果判断待测牛的基因型：若扩增结果仅出现一条206bp的DNA条带，则判定待测牛的基因型为不含15bp插入突变的野生型纯合子；若扩增结果仅出现一条112bp的DNA条带，则判定待测牛的基因型为含15bp插入突变的突变纯合子；若扩增结果出现206bp和112bp两条DNA条带，则判定待测牛的基因型为含15bp插入突变的杂合子。

8.根据权利要求6或7所述的应用，其特征在于，PCR反应体系以20μl计为：

9.根据权利要求6或7所述的应用，其特征在于，PCR反应条件为：94℃7min；94℃30s，57℃30s，72℃30s，共35个循环；72℃7min。