[发明专利]核酸探针及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种制备探针的方法，其特征在于，包括以下步骤：

将DNA样本进行片段化，以便获得第一DNA片段；

将所述第一DNA片段进行平端化，以便获得经过平端化的第一DNA片段；

将所述经过平端化的第一DNA片段与接头进行连接，以便获得连接接头的第一DNA片段；

利用PCR引物组对所述连接接头的第一DNA片段进行扩增，以便得到第一扩增产物，所述PCR引物组包括第一PCR引物和第二PCR引物，所述第一PCR引物和第二PCR引物的5’末端碱基均被生物素标记，所述第一扩增产物构成双链DNA探针。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述DNA样本含有至少一种生物的基因组DNA，

任选地，所述DNA样本是从人基因组DNA提取的，

任选地，所述片段化是通过高压气体雾化处理、超声处理、以及水力剪切处理的至少一种而进行的，

任选地，所述第一DNA片段的长度为100-200bp，

任选地，所述第一PCR  引物的核苷酸序列为：5’-CCACTACGCCTCCGCTTTCCTCTCTATG-3’，所述第二PCR引物的核苷酸序列为：5’-CTGCCCCGGGTTCCTCATTCT-3’，

任选地，进一步包括对所述双链DNA探针进行变性处理，以便得到单链DNA探针，

任选地，进一步包括将所述单链DNA探针与链霉亲和素包被的磁珠连接。

3.核酸探针，其特征在于，所述核酸探针是根据权利要求1-2任一项所述的方法获得的。

4.权利要求3所述的核酸探针在制备测序文库中的用途。

5.一种制备宏基因组测序文库的方法，其特征在于，包括：

根据权利要求1-2任一项所述的方法，利用宿主基因组DNA，制备探针；

将用于构建测序文库的宏基因组DNA进行片段化，以便获得第二DNA片段；

将所述第二DNA片段进行平端化，以便获得经过平端化的第二DNA片段；

在所述经过平端化的第二DNA片段的3’末端添加碱基A，以便获得3’末端添加碱基A的第二DNA片段；

将所述3’末端添加碱基A的第二DNA片段与接头进行连接，以便获得连接接头的第二DNA片段；以及

将所述连接接头的第二DNA片段进行扩增，以便获得第二扩增产物，所述第二扩增产物构成所述宏基因组测序文库，

其中，

利用所述探针对文库构建中间产物进行筛选以便获得经过纯化的文库构建中间产物，所述文库构建中间产物为所述第二DNA片段、经过平端化的第二DNA片段和连接接头的第二DNA片段的至少之一。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述宏基因组DNA是从人口腔、鼻腔、呼吸道、生殖道和皮肤的至少一种提取的，

任选地，所述宏基因组DNA来源于人口腔的唾液、口腔黏膜、扁桃体、咽和上牙龈牙菌斑的至少一种，

任选地，第二DNA片段的长度为250bp。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，在所述筛选过程中，所述探针与所述文库构建中间产物的重量比为50：1，

任选地，所述筛选进一步包括：

将所述文库构建中间产物与杂交试剂混合，进行杂交；

去除未发生杂交的探针，以便获得经过纯化的文库构建中间产物，

任选地，将所述文库构建中间产物与杂交试剂混合时，进一步包括添加以下三种封闭序列：

Block1：CCACTACGCCTCCGCTTTCCTCTCTATGGGCAGTCGGTGAT；

Block2：CTGCCCCGGGTTCCTCATTCTCT；以及

Block3：TACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT，

任选地，通过清洗去除未发生杂交的探针，利用DNA外切酶消化未发生杂交的文库构建中间产物单链序列。

8.一种宏基因组测序文库，其特征在于，所述宏基因组测序文库根据权利要求5-7任一项所述的方法获得的。