[发明专利]一种利用SILAC整体标记果蝇蛋白质组的方法及专用培养基

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种利用SILAC整体标记果蝇蛋白质组的方法及专用培养基。 

背景技术

果蝇（Drosophila melanogaster）是个体微小的昆虫。自从摩尔根开始利用它研究遗传学以来，果蝇逐渐成为遗传学、生理学、发育和进化生物学研究的模式生物。由于果蝇具有生长快、易饲养和繁殖、易维持大群体、价廉、表型丰富且绝大多数信号途径与高等生物一致等诸多优点，使得果蝇成为了现代生物学研究中的金虫。 

蛋白质是生物功能的直接执行者。蛋白质组学是系统鉴定和定量细胞内蛋白质，并研究其生物学功能的新兴学科。随着果蝇基因组测序的完成和蛋白质组学研究技术的快速发展，科学家已经可以实现果蝇蛋白质组鉴定的目标。蛋白质组的定量比较是研究基因突变或生物学处理及其效应关系的有效手段，也是当前蛋白质组学研究的重点领域。至今已有果蝇定量蛋白质组学的报道。如Brunner等利用ICAT技术定量比较了果蝇的蛋白质组。Xun等定量比较了帕金森病的果蝇模型。Krijgsveld等利用¹⁵N标记的酵母饲喂果蝇，得到了¹⁵N标记的果蝇，开始了果蝇体内标记和定量蛋白质组学的研究。但由于¹⁵N标记的蛋白质组同位素分布宽，轻重标之间容易重叠导致定量精度低，且轻重标难于区分，易产生假阳性等技术难题，使得定量蛋白质组学逐渐转向基于细胞培养过程中的重稳定性同位素标记氨基酸的整体蛋白质组标记技术（stable isotope labeling by amino acid in cell culture，SILAC）这一定量蛋白质组学研究的金标准。 

Mann研究小组利用SILAC技术对果蝇的SL2细胞系进行了研究，鉴定和定量了6000多个蛋白质，并比较了mRNA和蛋白质丰度的关联关系。尽管SILAC刚开始只是用于培养的细胞，如酵母、哺乳动物细胞等，最近SILAC标记整体小鼠的成功开创了整体动物重稳定性同位素标记的先河。Sury等利用SILAC技术标记了整体果蝇，但因技术限制，其标记效率只能达到96%左右，影响了定量的精度和检测的灵敏度。 

发明内容

本发明的一个目的是提供一种SILAC标记果蝇专用培养基。 

本发明提供SILAC标记果蝇专用培养基，按照如下方法制备：将SILAC标记的酵母菌体涂布在果蝇培养基上，得到SILAC标记果蝇专用培养基。 

上述果蝇培养基由低熔点琼脂糖、葡萄糖、对羟基苯甲酸甲酯、乙酸乙酯和水组成；所述低熔点琼脂糖、所述葡萄糖、所述对羟基苯甲酸甲酯、所述乙酸乙酯的质量 比为0.8：10：0.002：0.8。 

上述果蝇培养基组分具体浓度如下：所述低熔点琼脂糖在所述果蝇培养基中的浓度为0.8%（质量百分含量）；所述葡萄糖在所述果蝇培养基中的浓度为10%（质量百分含量）；所述对羟基苯甲酸甲酯在所述果蝇培养基中的浓度为0.002%（质量百分含量）；所述乙酸乙酯所述琼脂在所述果蝇培养基中的浓度为0.8%（质量百分含量）。 

其中果蝇培养基组分中对羟基苯甲酸甲酯以对羟基苯甲酸甲酯乙醇溶液的形式加入果蝇培养基中，对羟基苯甲酸甲酯乙醇溶液按照如下方法制备：将对羟基苯甲酸甲酯溶于95%乙醇水溶液中得到的混合液，且对羟基苯甲酸甲酯在混合液中的浓度为10%（质量百分含量）。 

上述专用培养基中，所述SILAC标记的酵母菌体按照如下方法制备：将赖氨酸营养缺陷型酵母菌株在含有重稳定性同位素标记赖氨酸的SILAC标记酵母专用培养基中培养，收集菌体，得到SILAC标记的酵母菌体。 

本发明的实施例中的赖氨酸营养缺陷型酵母菌株为敲除菌株BY4741△YBR115C，购自Saccharomyces Genome Deletion Project。