[发明专利]与番茄黄化卷叶病毒病抗性基因Ty-2紧密连锁的分子标记

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种与番茄黄化卷叶病毒抗性基因紧密连锁的分子标记及其应用。

背景技术

番茄黄化卷叶病毒(TYLCV)属于双生病毒科(Geminiviridae)菜豆金色花叶病毒属(Begomovirus),主要通过烟粉虱(Bemisia tabaci)传播。TYLCV起源于中东地区和地中海盆地，主要分布在地中海西部、日本、美国东南部和加勒比海地区，是一种热带、亚热带地区极具毁灭性的番茄病毒病。自1964年被正式命名以来(Cohen and Harpaz 1964)，已经在中东、欧洲、东南亚、东亚及非洲等众多国家和地区相继造成危害(Czosnek and Laterrot,1997;Polston and Anderson1997;Moriones and Navas-Castillo,2000)。自20世纪90年代起，在中国的浙江、上海、广西、云南、江苏、河南、广东、福建、海南和台湾等地也相继在番茄上发现有TYLCV的危害(蔡健和等，2006；何自福等，2007；王东生等，2007；赵统敏等，2007)。

TYLCV对番茄生产存在着严重威胁，而选育抗病品种是防治这一病害最有效的方法。研究表明，野生番茄中存在抗TYLCV的基因，其中抗病基因Ty-2在越南、印度、以色列和我国大陆等地特别是亚洲地区均表现出对TYLCV的较高抗性。Ty-2是一个来自于多毛番茄的单个显性基因，最初被定位在第11号染色体的长臂约19cM的片段上，2009年被进一步定位在6.5cM区域内(Hanson et al.,2006;Ji et al.,2007c;Ji et al.,2009)。鉴于此,对Ty-2基因进行精细定位，获得与与Ty-2紧密连锁甚至共分离的分子标记，将为Ty-2的克隆奠定基础，同时为Ty-2基因的抗病育种提供更紧密连锁的分子标记。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种与番茄黄化卷叶病毒Ty-2抗性基因紧密连锁的分子标记。

本发明的另一目的在于提供该分子标记在番茄黄化卷叶病毒抗性基因定位或检测以及标记辅助育种中的应用。

为了实现本发明目的，本发明提供了一种与番茄黄化卷叶病毒Ty-2抗性基因紧密连锁的分子标记，该分子标记的核苷酸序列如SEQID No.1所示。

本发明还提供了一种扩增与番茄黄化卷叶病毒Ty-2抗性基因紧密连锁的分子标记的引物对，该引物对序列如下：

P1:5’-CACACATATCCTCTATCCTATTAGCTG-3’；

P2:5’-CGGAGCTGAATTGTATAAACACG-3’。

本发明还提供了一种含有上述分子标记的载体。

本发明还提供了一种与番茄黄化卷叶病毒抗性基因紧密连锁的分子标记的检测方法，该方法以抗感番茄黄化卷叶病毒的番茄基因组DNA为模板经PCR扩增，得到能同时鉴定父本、母本及其杂合体的基因型的特异谱带，该特异谱带包括携带抗性基因的植株谱带和不携带抗性基因的植株谱带，所述携带抗性基因的植株谱带为核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的分子标记。

所述不携带抗性基因的植株谱带的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

上述方法中，PCR反应体系为：

10μL反应体系包括正、反向引物各0.4μM，0.8mM dNTPs，2.5mMMgCl₂,1μl 10X buffer，0.25units Taq聚合酶(New England Biolabs,Ipswich,MA)，DNA模板15ng。

上述方法中，PCR扩增程序为：94℃预变5min;94℃变性30s,55℃或60℃退火45s,72℃延伸30-60s,37个循环;72℃延伸5-10min。

本发明还提供了上述分子标记和检测方法在番茄黄化卷叶病毒抗性基因定位或检测或标记辅助育种中的应用。

本发明具备的有益效果在于：

1）本发明的分子标记进一步定位了番茄黄化卷叶病毒抗性基因Ty-2。标记的特异性强、稳定性高，并且标记的筛选方法操作简便快捷，对检测设备和引物模板质量要求不高，具有试验试剂用量少，速度快，成本低，适合大批次、高通量、自动化的优点。非常适合现代农业分子育种的实现；

2）本发明为番茄黄化卷叶病毒抗性基因Ty-2的图位克隆提供了重要的分子遗传学信息；