[发明专利]一种快速检测猪巨细胞病毒的LAMP试剂盒

权利要求书

1.一种快速检测猪巨细胞病毒的LAMP试剂盒，其特征在于，每个反应用量为23μL的LAMP反应液和1μL的BstDNA聚合酶，该23μL的LAMP反应液中各组分及浓度如下：2.5μL的聚合酶缓冲液，3mM的MgSO₄，1M甜菜碱，0.4mMdNTP，0.25mM引物F3，0.25mM引物B3，2mM引物FIP，2mM引物BIP；其中，所述2.5μL的聚合酶缓冲液的组分及浓度为：20mM Tris-HCl、其pH 8.8，10mM KCl，10mM(NH₄)₂SO₄，，1％Triton X-100；

其中各引物序列为：

F3：AAAAATATAGTTCCGCACACT；

B3：TTTCTAATCTCGGCAGCG；

FIP：TGACATGAACGTCTCTATACGTCGTTTTTTTTTTGTTAGGACGTATACCA；

BIP：TGATAGGTCTTCATATAAAGTGCCCTTTTGACCATTCAAATTTATATATCCAGC。

2.权利要求1中LAMP试剂盒的使用方法包括如下步骤：

(1)运用无菌双蒸水配制上述23μL的LAMP反应液于反应管中；

(2)取1μL待检测基因组DNA于步骤(1)中23μL的LAMP反应液中，在95℃条件下作用10min使基因组DNA解链为单链状态，作用完成后将反应管置于冰上，使其快速冷却；

(3)于步骤(2)冷却的反应管中加入1μL的BstDNA聚合酶，使终反应体积为25μL上下颠倒混匀数次，再10000rpm瞬时离心0.5min，使反应液全部沉到管底；

(4)将步骤(3)中所得反应物于65℃恒温水浴锅中，反应60min；

(5)反应完毕后取出反应管12000rpm离心1min，通过观察管底是否有沉淀，或取4μl反应终产物于2％琼脂糖凝胶中电泳30min后于紫外灯下观察电泳图像来判断阴阳性。