[发明专利]以蝉幼虫为寄主的蝉花子实体及其培育方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种以蝉幼虫为寄主的蝉花子实体及其培养方法。

背景技术

蝉花(Cordyceps sobolifera；C.cicadae)也称蝉蛹草，是一种具有动物和植物特征的奇妙生物复合体，其生物根是蝉蛹或山蝉的幼虫体，花是从单个或是2-3个蝉幼虫头部生长出来的，约一寸多长，从顶端开花、分枝。蝉花属于生物病态现象，是一种虫菌相依的组合体。秋季来临，蝉钻入土中，逐渐变成蝉蛹，在羽化前被虫草菌类寄生，当生活备件适宜时，就开始在虫体内萌发成菌丝体，吸收虫体的营养，最终虫体被菌丝体完全占有而只剩下一个躯壳。万物复苏时节，菌丝体又从营养阶段转化为有性阶段，渐渐从顶端开花分枝，故而得名蝉花，主要分布于安徽、浙江、福建、广东、四川、云南、江苏等地。

南北朝时期雷斅写的《雷公炮灸论》中记载道：“蝉花，凡使，要白花全者。收得后于屋下东角悬干，去甲、土后，用浆水煮一日，至夜焙干，研细用之。”这是迄今为止发现的，关于蝉花最早的文字记载。同时也是关于虫生真菌最早的文字记载。而《雷公炮灸论》则为我国最早的中药炮灸学专著。书中记载了300多味中草药的加工方法，距今1500年，比冬虫夏草的记载整整提早了800年。专家们据此推测，在3000年前，我们的祖先就认识蝉花，并对其药用价值有所了解。此后，专家们又从《本草纲目》上查到了有关蝉花用途的记载。从北宋中叶苏颂撰写的《图经本草》中看到了有关蝉花的记载：“今蜀中有一种蝉，其蜕壳头上有一角，如花冠状，谓之蝉花。医工云：人药最奇。”从宋代唐慎微的《征类本草》，以及明朝李时珍的《本草纲目》也都找到了有关蝉花记载。

金蝉，又名知了猴，隶属于同翅目蝉科中型到大型昆虫，营养价值高，还具有良好的药用价值，金蝉含蛋白质，为牛肉的2.5倍，鸡肉的2倍，又由于含有人体必需的多种营养素，对促进生长发育，体虚患者康复等，都有极佳的辅助治疗作用，是天然无公害高效营养食品，特别是金蝉能进行大规模人工饲养，为生产蝉花提供稳定安全的原料来源，因此，用金蝉幼虫进行人工培养研究蝉花具有广阔的产业化应用前景。在自然界蝉幼虫寄主虫草菌完成一个世代需3年以上时间，这表明形成蝉花有性型的时间长，而且在自然界菌虫感染率低。

中国发明专利CN200810068632公开了一种蝉花的人工培养方法，(1)分离原始菌株，(2)培养蝉花拟青霉，及用蝉拟青霉孢子感染家蚕老熟幼虫。以上采用老熟家蚕幼虫。此外，一些生物学专家采用液体深层发酵的方法解决对蝉花市场的需求，由于液体发酵生产只有菌丝体，没有虫体。另外用大米、小麦等作培养基生产的蝉花子实体也没有蝉虫体，无法获得和天然同样外形的蝉花，而用蝉幼虫生产蝉花目前尚无相关报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种感染率高、出草率高的蝉花子实体及其培育方法。

为了达到上述目的，本发明提供了一种以蝉幼虫为寄主的蝉花子实体的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：

第一步：将蛹虫草子实体在固体培养基上经孢子分离提纯复壮，得到蛹虫草菌丝体，培养温度为20℃，培养时间12天，淘汰绒毛多不转色的菌丝体，挑选转色好，转色快，贴着培养基长势快的菌丝体留种；

第二步：在20℃-22℃，120r/m的条件下，将第一步得到的留种菌丝体经用液体培养基振荡培养4-5天，并且有小菌球充满液体培养基，制成液体菌种；

第三步：用消毒剂对金蝉幼虫进行浸泡消毒10分钟，然后用无菌水洗三次，用紫外灯照2小时，最后在蝉幼虫身体上用无菌针扎多个小洞，用无菌注射器吸入第二步得到的液体菌种注入蝉幼虫体后背；

第四步：将第三步得到的已注射感染的蝉幼虫置于无菌的组培瓶内，用注射器将0.1ml液体菌种注入蝉幼虫外体，盖上瓶盖，黑暗保湿培养3天，温度为18℃-23℃，湿度为80-100％；然后在20℃下培养20天，光照为12h/d，光照强度为在150-2501x，打开瓶盖，注入2ml无菌水，继续培养30-40天，至蝉花子实体长至3cm及以上长，即收获。

优选地，所述第一步中的固体培养基的成份为：以重量百分比计的蔗糖1.5％，马铃薯2％，KH₂PO₄0.25％，MgSO₄·7H₂O 0.15％，维生素B₁0.01％，琼脂1.6％和蛋白胨0.8％。