[发明专利]PCR-焦磷酸法检测副溶血弧菌的检测引物、试剂盒和检测方法无效
| 申请号： | 201210272737.X | 申请日： | 2012-08-01 |
| 公开（公告）号： | CN102808024A | 公开（公告）日： | 2012-12-05 |
| 发明（设计）人： | 许龙岩;袁慕云;曹际娟;唐勤;邹志飞 | 申请（专利权）人： | 许龙岩;袁慕云;曹际娟;唐勤;邹志飞 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/63 |
| 代理公司： | 广州科粤专利商标代理有限公司 44001 | 代理人： | 刘明星 |
| 地址： | 510623 广东省广州*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | pcr 磷酸 检测 溶血 弧菌 引物 试剂盒 方法 | ||
1.一种PCR-焦磷酸法检测副溶血弧菌的检测引物，其特征在于，包括PCR引物和测序引物：
PCR引物：上游引物F：GAGATTCCGCTGGGTTTGTAA；
下游引物R：TGAACCAGAAGCGCCAGTAGTAC；
测序引物S：AAATAACGCGTGGAAT。
2.一种PCR-焦磷酸法检测副溶血弧菌的检测试剂盒，包括DNA提取试剂，PCR反应试剂，单链模板制备试剂，焦磷酸测序试剂，PCR引物和测序引物，其特征在于，所述的PCR引物和测序引物为：
PCR引物：上游引物F：GAGATTCCGCTGGGTTTGTAA；
下游引物R：TGAACCAGAAGCGCCAGTAGTAC；
测序引物S：AAATAACGCGTGGAAT。
3.一种非诊断目的的PCR-焦磷酸法检测副溶血弧菌的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）对样品进行增菌培养，提取增菌液中菌体的基因组DNA作为模板；
（2）使用权利要求1所述的PCR引物进行PCR反应，回收PCR产物，制备单链模版，然后应用权利要求1所述的测序引物对PCR产物进行焦磷酸测序，自测序引物3/端后的第一个碱基开始测序，测序引物后的34个碱基序列为CCAAGGATTCACAGCAGAAGC CACAGGTGCTTTT时，判断样品中含有副溶血弧菌。
4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述的PCR反应，其扩增体系50μL，PCR Mix Buffer 25μl，Taq酶5μl，MgCl2 1μl，10μM上、下游引物各2μl，DNA模板1μl，去离子水14μl，反应条件为预变性95℃4min；95℃15s，65℃30s,，72℃30s，43个循环；72℃12min。
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