[发明专利]移植肾排斥反应预警试剂盒及其使用方法

说明书

本申请是专利申请201110438939.2的分案申请。

技术领域

本发明涉及一种预警试剂盒，具体讲，涉及一种移植肾排斥反应预警试剂盒及其使用方法。

背景技术

全球因慢性肾功能衰竭而行透析的人数已由1990年的42.6万人增加至2000年的106.5万人，预计到2010年将达到200余万人。这一人数的增长，致使全球透析费用迅速增长，对发达国家、发展中国家均造成了巨大的经济负担。我国约有100万尿毒症患者，每年新增12万人，每年约有50万患者需要肾移植。目前我国已累计开展各种器官移植近10万例，成为世界第二器官移植大国，其中最多的是肾脏移植，累计达8万多例。移植受者和移植物有功能长期存活是器官移植追求的最终目标。随着手术技术的进步、组织配型技术的提高和免疫抑制剂的发展，肾移植术后1年存活率已大大提高，但长期预后仍有待改善。急性排斥反应的反复发作和慢性排斥反应是引起移植物失功的主要原因，长期服用免疫抑制剂所带来的毒副作用，如肾毒性、感染、诱发肿瘤等，亦影响移植物及受者的长期存活。

反复发作的急性排斥反应与慢性排斥反应是引起移植物失功的重要原因，但临床上缺乏有效的动态监测与无创诊断手段。移植肾穿刺活检是目前最可靠的诊断方法，但具有创伤性，可引起感染、出血、甚至移植物丢失等，不易被患者接受且不利于动态观察。并且活检取材也有一定的局限性，根据Banff标准，许多临床怀疑移植肾排斥的患者在病理形态上可能并不能符合排斥的诊断标准。

因此，迫切需要探索适合我国人群的、可靠的、可满足动态观察需要的移植肾排斥反应无创性诊断方法。该课题的完成将在很大程度上辅助延长患者移植后生存期，提高生存质量，减少国家医疗投入，节省家庭开支，具有极大的临床应用价值和社会、经济效益，并有助于我国移植界具有国际领先水平的自主知识产权成果的产出。

移植肾排斥反应的无创诊断技术的研究现状：自20世纪80年代起，移植学界已开始动态观察移植受者各种血清中多种细胞因子水平及变化，探索移植排斥反应的发生机制及其诊断方法。例如IL-6、可溶型IL-6受体（IL-6R）可溶性CD30(sCD30)、肝细胞再生因子（hepatocyte growth factor,HGF）、IL-18、转移生长因子-β（Transforming Growth Factor Beta，TGF-β）、IL-17、颗粒酶B、穿孔素、FasL、粒溶素、CD154、ICOS、CTLA4、PD-1等分子与移植肾排斥反应相关。中国人民解放军第三〇九医院器官移植中心在1994年对37例肾移植受者和55名正常人血清IL-6水平的动态测定，结果表明，移植肾急性排异患者血清IL-6水平明显升高，而慢性排异患者IL-6水平无显著变化，提示血清IL-6水平监测是移植肾排斥反应的重要诊断指标之一；随后，又分别对血清免疫细胞抑制性受体（leukocyte-associated Ig-like receptor-1,LAIR-1），可溶型LAIR-2分子，HLA-G，血小板/T细胞活化抗原1（platelet and T cell activation antigen 1，PTA1，CD226）和同种异体混合淋巴细胞反应中特异性表达的p140等与移植肾排斥反应的相关性进行了研究和报道。然而，尽管众多科研工作者致力于筛选移植排斥特异性的生物标记，但至今尚未筛选出特异性分子应用于排斥反应的无创性诊断和鉴别诊断。目前国际上仍缺乏移植肾排斥反应的无创诊断和预警体系。

移植排斥反应是一个非常复杂的过程，细胞免疫和体液免疫机制均参与这个过程，而且，移植物的差异，手术的影响，移植受者个体的差异以及临床上不同免疫抑制方案的应用等众多因素的参与使移植排斥反应的诊断更加复杂和困难。另外，既往研究表明，通过检测单个分子来明确诊断移植排斥反应有很大的难度。早期卵巢上皮癌的血清诊断体系的成功建立，为移植排斥反应的无创诊断提供了新的研究思路。2005年，耶鲁大学的Gil等通过对已知蛋白标记的筛选，成功建立了由Leptin，泌乳刺激素（prolactin），骨桥蛋白（osteopontin，OPN）和胰岛素样生长因子Ⅱ（IGF-Ⅱ）组成的早期卵巢上皮癌的血清诊断体系，将诊断敏感度、特异性、阳性预测值（positive predictive value,PPV）和阴性预测值（negtive predictive value,NPV）分别提高至95%、95%、95%和94%。因此，在鉴定移植排斥特异性标志物的同时，对已知的移植排斥相关的生物标记进行筛选和组合，通过多分子综合分析，建立排斥反应的联合标志物群诊断和预警体系，具有更强的可行性和更高的敏感度。