[发明专利]一种重组人促卵泡激素的纯化方法

权利要求书

1.一种重组人促卵泡激素的纯化方法，其特征在于：其具体步骤为：

染料亲和层析

（1）用平衡缓冲液对染料亲和层析柱进行平衡，将含重组人促卵泡激素目的蛋白的细胞培养上清进行上样，重组人促卵泡激素目的蛋白吸附于染料亲和层析介质上；

（2）用含有NaCl的平衡缓冲液对步骤（1）处理的层析柱进行洗脱，使重组人促卵泡激素目的蛋白穿出染料亲和层析柱，收集洗脱蛋白液；

疏水作用层析

（3）用含盐的平衡缓冲液对疏水层析柱进行平衡，将步骤（2）中的洗脱蛋白液进行上样，使重组人促卵泡激素目的蛋白穿出疏水层析柱，收集穿出蛋白液；

脱盐层析

（4）将步骤（3）中的穿出蛋白液上样到用平衡缓冲液平衡好的脱盐柱上进行脱盐，收集脱盐的蛋白液；

羟基磷灰石层析

（5）用平衡缓冲液对羟基磷灰石层析柱进行平衡，将步骤（4）中收集的蛋白液上样到羟基磷灰石层析柱上，重组人促卵泡激素目的蛋白穿出并收集，即获得目的蛋白原液。

2.根据权利要求1所述的重组人促卵泡激素的纯化方法，其特征在于：染料亲和层析的介质选用Blue Sepharose CL-6B或Blue Sepharose 6 Fast Flow或Blue Sepharose High Performance。

3.根据权利要求1所述的重组人促卵泡激素的纯化方法，其特征在于：步骤（1）-（5）中所用的平衡缓冲液为Tris-HCl缓冲液或磷酸盐缓冲液或Hepes缓冲液，缓冲液浓度为10mmol/L-100mmol/L，pH值为6.5-10.0。

4.根据权利要求1所述的重组人促卵泡激素的纯化方法，其特征在于：步骤（2）中的平衡缓冲液中NaCl的浓度为1.0mol/L-2.5mol/L。

5.根据权利要求1所述的重组人促卵泡激素的纯化方法，其特征在于：步骤（3）中所述的疏水层析采用的层析介质为苯基琼脂糖凝胶6（high sub）或丁基琼脂糖凝胶4或者辛基-琼脂糖凝胶4FF。

6.根据权利要求1所述的重组人促卵泡激素的纯化方法，其特征在于：步骤（3）中的盐为NaCl或（NH₄）₂SO₄或者Na₂SO₄，浓度为0.5mol/L-2.0mol/L。

7.根据权利要求6所述的重组人促卵泡激素的纯化方法，其特征在于：步骤（3）中的盐为NaCl。

8.根据权利要求1所述的重组人促卵泡激素的纯化方法，其特征在于：步骤（4）中的脱盐层析介质为Sephadex G-25 Fine或Sephadex G-25 Medium或Sephadex G-25 Coarse。

9.根据权利要求1所述的重组人促卵泡激素的纯化方法，其特征在于：步骤（5）中羟基磷灰石层析介质为Bio-gel羟基磷灰石或者CHT羟基磷灰石。