[发明专利]水产养殖鲇鱼杂种的CH4分子标记DGGE鉴定方法

权利要求书

1.水产养殖鲇鱼杂种的CH₄分子标记DGGE鉴定方法，其特征在于：应用PCR扩增后的南方鲇的CH₄基因片段与鲇的CH₄基因片段之间存在的种间序列差异鉴定南方鲇、鲇及其杂交子代。

2.根据权利要求1所述的水产养殖鲇鱼杂种的CH₄分子标记DGGE鉴定方法，其特征在于：包括以下步骤：

A 分别取南方鲇、鲇及其杂交样本，提取基因组DNA；

B 分别以南方鲇、鲇及其杂交样本的总DNA为模板，使用特定引物进行PCR扩增；

C  DGGE分析检测种间差异，经DGGE检测，在一个泳道上同时出现南方鲇和鲇的两条基因条带，则为南方鲇和鲇的杂交种。

3.根据权利要求2所述的水产养殖鲇鱼杂种的CH₄分子标记DGGE鉴定方法，其特征在于：所述的步骤B中的特定引物为CH₄基因片段的特定引物，碱基序列为：

正向引物（SEQID NO:3） 5’-TCCCCAAGGTTTACTTGCTCGCTCC-3’；

反向引物（SEQID NO:4） 5’-CGATGGATCTGGATATGTGGCGCAC-3’；

且在正向引物的5’末端添加了GC夹板（SEQID NO:5）5’- CGGGGGCCGGGCCGGGCGGGCGTGGCGGGCGCTGCGGGCG-3’。

4.根据权利要求3所述的水产养殖鲇鱼杂种的CH₄分子标记DGGE鉴定方法，其特征在于：所述的CH₄基因片段的特定引物，所扩增出的南方鲇的基因片段的核苷酸序列（SEQID NO:1）为：

CCAGAGACTT CAGAATCAGT GACCCTGACT TGCTATGTAA AAGACTTCTA CCCTAAGGAG GTGTATGTGT CTTGGCTTGC TGATGATAAA CCAGTGGAGG GTCTGAGCTA CTATAAGGAG AACACCACCG TTCCCCAGAA TGACAAACAA TTTTCAATGT ATAGTCAGC TGATTGTTGA TTCCCAATCT TGGAAGAAA GGCGTTGTGT ACACCTGCAG GGTTTATCAC GAGTCCATCG AGGACCCA。

5.根据权利要求3所述的水产养殖鲇鱼杂种的CH₄分子标记DGGE鉴定方法，其特征在于：所述的CH₄基因片段的特定引物，所扩增出的鲇的基因片段的核苷酸序列（SEQID NO:2）为：

CCAGAGACTT CAGAATCAGT GACCCTGACT TGCTATGTAA AAGACTTCTA CCCTAAGGAG GTGTATGTGT CTTGGCTTGC TGATGATAAA CCAGTGGAGG GTCTGAGCTA CTATAAGGAG AACACCACCA TTCCCCAGAA TGAGAAACAA TTTTCAATGT ATAGTCAGCT GATTGTTGAT TCCCAATCTT GGAAGAAAGG CGTTGTGTAC ACCTGCAGGG TTTATCACGA GTCCATCGAG GACCCA。

6.根据权利要求2中任意一项所述的水产养殖鲇鱼杂种的CH₄分子标记DGGE鉴定方法，其特征在于：所述的步骤C中的DGGE，所使用的变性梯度凝胶组分是指变性梯度为30%与60%的变性剂的混合液。

7.根据权利要求2所述的水产养殖鲇鱼杂种的CH₄分子标记DGGE鉴定方法，其特征在于：所述的步骤C中的DGGE，在恒温60°C的1× TAE电泳缓冲液中进行，首先在80V电压下运行20min，然后在150V电压下运行2.5h。