[发明专利]银杂化SBA-15电化学发光免疫传感器的制备及应用

权利要求书

1.银杂化SBA-15电化学发光免疫传感器的制备，其特征是包括以下步骤：

（1）银杂化的SBA-15（AgSBA-15）纳米复合材料的制备；

（2）Ru(bpy)₃²⁺与AgSBA-15复合材料（Ru(bpy)₃²⁺-AgSBA-15）的制备；

（3）抗体固载的Ru(bpy)₃²⁺-AgSBA-15免疫复合物（Ru(bpy)₃²⁺-AgSBA-15/Ab）的制备；

（4）电化学发光免疫传感器的制备。

2.根据权利要求1所述的银杂化SBA-15电化学发光免疫传感器的制备，其特征是所述AgSBA-15纳米复合材料的制备，步骤如下：取2mL银纳米粒子胶体溶液和4～6mg氨基化的SBA-15，震荡24h，离心分离，去除上清液，得到AgSBA-15。

3.根据权利要求1所述的银杂化SBA-15电化学发光免疫传感器的制备，其特征是所述Ru(bpy)₃²⁺-AgSBA-15的制备，步骤如下：取5～15mg十二烷基磺酸钠超声溶解于3mL超纯水中，将AgSBA-15加到上述溶液中，震荡24h，离心分离，去除上清液；然后加入2mL 1×10^-3mol/L Ru(bpy)₃²⁺溶液，震荡24h，离心分离，去除上清液，得到Ru(bpy)₃²⁺-AgSBA-15，再分散于500μL的PBS溶液（pH=7.4）中，避光保存。

4.根据权利要求1所述的银杂化SBA-15电化学发光免疫传感器的制备，其特征是所述Ru(bpy)₃²⁺-AgSBA-15/Ab的制备，包括以下步骤：

（1）壳聚糖-离子液体的配制：将壳聚糖加入到体积分数为1% 的乙酸中搅拌2h，制得质量分数0.5%的壳聚糖溶液，然后用该壳聚糖溶液稀释离子液体1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐，得到离子液体浓度为5～15ng/mL的壳聚糖-离子液体；

（2）取浓度10μg/mL的肿瘤标志物抗体400～600μL和500μL Ru(bpy)₃²⁺-AgSBA-15的PBS溶液混合，在4℃的培养箱中震荡24h，然后，在冷冻离心机中离心分离，得到Ru(bpy)₃²⁺-AgSBA-15/Ab，将其分散在500μL的壳聚糖-离子液体中，保存在4℃的冰箱中。

5.根据权利要求1所述的银杂化SBA-15电化学发光免疫传感器的制备，其特征是所述电化学发光免疫传感器的制备，包括以下步骤：

（1）将直径4mm的玻碳电极依次用1.0、0.3和0.05μm的三氧化二铝抛光粉抛光处理，乙醇超声清洗，再用超纯水冲洗干净，然后将电极置于5mmol/L铁氰化钾溶液中，在–0.2～0.6V扫描，峰电位差小于110mV；

（2）将3～5μL Ru(bpy)₃²⁺-AgSBA-15/Ab滴涂到电极表面，4℃冰箱中保存至干燥；

（3）滴涂3μL 100μg/mL牛血清白蛋白，4℃冰箱中保存至干燥，超纯水清洗，晾干成膜，保存在4℃的冰箱中。