[发明专利]银杂化SBA-15电化学发光免疫传感器的制备及应用

说明书

技术领域

本发明涉及银杂化SBA-15电化学发光免疫传感器的制备及应用。具体是采用银杂化介孔SBA-15即AgSBA-15复合材料，制备一种检测多种肿瘤标志物的无标记型电化学发光免疫传感器，属于新型功能材料与生物传感检测技术领域。

背景技术

肿瘤标志物是肿瘤组织自身产生的，可以反映肿瘤的存在和生长的一类生化物质。

它们可能不存在于正常成人组织而仅见于胚胎组织，或在肿瘤组织中的含量大大超过在正常组织里的含量，它们的存在或量变可以提示肿瘤的性质，借以了解肿瘤的组织发生、细胞分化、细胞功能，从而帮助肿瘤的诊断、分类、预后判断以及治疗指导等。

肿瘤标志物为肿瘤早发现提供了可能，肿瘤标志物的检测更被列入了体检项目。

目前检测肿瘤标志物的方法主要有放射免疫分析、酶联免疫分析、化学发光免疫分析及电化学免疫分析等，但是这些检测方法存在以下不足。

1、放射免疫分析：具有很高的灵敏度和准确度，反应条件要求一般，但是该技术所用试剂具有放射性，对人体有一定的危害。

2、酶联免疫分析：具有很高的灵敏度，所用仪器简单，但是该方法是一次性的，响应时间长，并且无法重复测量。

3、化学发光免疫分析：具有灵敏度高、响应时间短的特点，但是发光分子的发光时间较短，并且只能利用一次。

4、电化学免疫分析：具有操作简便、响应时间短和选择性高等优点，一般来讲其灵敏度相对电化学发光免疫传感器低一些。

为了解决上述问题，本发明提供了一种简单、快速、灵敏度高和选择性高的电化学发光免疫分析方法。

经对现有专利技术的检索发现，目前在免疫传感器领域，CN200910212772.0公开了一种电致化学发光传感器的制备方法，使用核壳结构的SiO₂包裹发光物质Ru(bpy)₃²⁺固载甲胎蛋白的二抗，该传感器的线性范围为0.05～20ng/mL，检测限为35pg/mL。

CN201110199112.0公开了一种磷化蛋白的电化学免疫传感器，该传感器的线性范围为0.02～20ng/mL，检测限为0.01ng/mL。

CN201010524197.0公开了一种检测肿瘤标志物的电致化学发光免疫传感器的研究及应用。

以上发明均为夹心型免疫传感器，本发明的无标记免疫传感器与之相比制备过程简单易行。

另外，CN201110043433.1公开了一种非标记型电流型免疫传感器及其制备方法及应用，该传感器对癌胚抗原的检测限达到3pg/mL。

本发明采用AgSBA-15复合材料作为传感器构建材料，降低了传感器的检出限，方法用于多种肿瘤标志物的分析，其检测限1.3～1.5pg/mL之间。由此可见，本发明将AgSBA-15复合材料引入传感器的制备中，使方法的灵敏度提高超过了100%。

本发明采用AgSBA-15复合材料构建的无标记型免疫传感器，是一种低成本、高灵敏、特异性好、快速检测肿瘤标志物的技术，且制备过程简单，有效克服了目前肿瘤标志物检测方法的不足。

发明内容

本发明的目的之一是避免传统检测方法的仪器复杂、响应时间长、选择性和灵敏度低等缺点，提供一种快速且灵敏度高的肿瘤标志物电化学发光免疫传感器的制备方法。

本发明的目的之二是将该电化学发光免疫传感器应用于肿瘤标志物的检测。

本发明的技术方案如下：

1. 本发明银杂化SBA-15电化学发光免疫传感器的制备，其特征是包括以下步骤：

（1）AgSBA-15纳米复合材料的制备；

（2）Ru(bpy)₃²⁺与AgSBA-15复合材料（Ru(bpy)₃²⁺-AgSBA-15）的制备；

（3）抗体固载的Ru(bpy)₃²⁺-AgSBA-15免疫复合物（Ru(bpy)₃²⁺-AgSBA-15/Ab）的制备；

（4）电化学发光免疫传感器的制备。

（1）中所述的AgSBA-15纳米复合材料的制备，步骤如下：取2mL银纳米粒子胶体溶液和4～6mg氨基化的SBA-15，震荡24h，离心分离，去除上清液，得到AgSBA-15。