[发明专利]一种高F值金枪鱼寡肽制备方法

权利要求书

1.一种高F值金枪鱼寡肽的制备方法，其特征在于该制备方法包括以下步骤：

预处理：称取解冻后的金枪鱼碎肉，采用匀浆机匀浆两分钟，直到无大块鱼肉为止，然后按一定比例w/v=1:7加入蒸馏水，放在反应器中，35°C保温；

固定化酶制备：

称取一定量的壳聚糖，用2%乙酸溶液至完全溶解，用注射器将制备好的壳聚糖凝胶按1:3 90%乙醇溶液中，凝结2h，加入5%戊二醛，开动磁力搅拌器，在150rpm转速下振荡1h，用去离子水充分洗涤，至无戊二醛残液，得到交联好的载体；

在交联好的载体中，加入一定量由pH 3.0的乳酸-乳酸钠配置的胃蛋白酶溶液，于4℃冰箱中交联10h，用蒸馏水洗涤，布氏漏斗抽滤得到固定化胃蛋白酶；

在交联好的载体中，加入一定量由蒸馏水配制的木瓜蛋白酶溶液，于4℃冰箱中交联10h，用蒸馏水洗涤，布氏漏斗抽滤得到固定化木瓜蛋白酶；

将固定化胃蛋白酶和固定化木瓜蛋白酶装配于一个两层筒状酶反应器中，该酶反应器由上下两层旋转筐连接而成，将固定化胃蛋白酶装配在上面一个旋转筐夹层中，将固定好的木瓜蛋白酶装在下面一个旋转筐夹层中；

酶解：让反应液依次流过这两个旋转筐，所述旋转筐内部设有主轴带动叶轮转动，使酶解液与固定化酶发生相对运动，利于固定化酶与酶解液充分接触；

其中，第一步酶解条件如下：调节反应液pH至2.0，放入上层旋转筐内进行酶解，酶解温度为40℃，每隔半小时调节一次pH值，让酶解液保持在pH2.0下进行酶解，酶解时间为4小时；

第二步酶解条件如下：打开上下层旋转筐之间的阀门，让第一步酶解液流入下层旋转筐中，调节第一步酶解液pH至6.5 ，酶解温度55℃，酶解时间3小时，每隔半小时调节一次pH值，让酶解液始终保持在pH6.5下进行酶解；酶解完成后酶解液调节pH至中性，冷却至室温，从下层旋转筐取出后4500r/min 离心15min，提取上清液备用；

微滤：第二步酶解得到的上清液经5000Da微滤膜微滤，压力为30psi ，温度35°C，除去未水解的大分子蛋白质和多肽；

活性炭动态吸附：将活性炭颗粒装载于玻璃吸附柱中制备而成的活性炭吸附柱对微滤后的滤液进行动态吸附，其中活性炭颗粒由粒度200目、比表面积1200㎡的活性炭一和粒度200目，比表面积1300㎡的活性炭二按质量比1:2装填，活性炭颗粒与物料比为1:10，调节微滤液的pH2.0~4.0，以0.5ml/min流速进行层析，吸附温度为40℃，动态吸附3小时，以3000r/min离心10min，去上清液即为高F值金枪鱼寡肽溶液。

2.根据权利要求1所述的高F值金枪鱼寡肽的制备方法，其特征在于所述活性炭吸附柱包含用于吸附酶解液中芳香族氨基酸的竖向流体通道和用于活性炭吸附柱洗脱的横向流体通道，两个流体通道均设有独立流体泵。

3.根据权利要求1所述的高F值金枪鱼寡肽的制备方法，其特征在于所述活性炭吸附柱的底部设有加热部件。

4.根据权利要求1所述的高F值金枪鱼寡肽的制备方法，其特征在于所述活性炭动态吸附步骤，将活性炭装入吸附反应器，该吸附反应器包含一个旋转夹层筒，旋转夹层筒夹层为解吸管路，旋转夹层筒的内侧管路为吸附管路， 

吸附时，打开泵一，设定泵一压力为0.04Mpa，吸附温度40℃，酶解液进入媳妇管路，开动叶片，使其与活性炭充分接触，同时打开左侧泵二，设定压力为0.02Mpa，设定解吸温度15℃，让解吸液流入解析管路中，由于压力较小，不会进入到酶解液中，解吸液会将活性炭吸附好的芳香族氨基酸解吸下来，打开右侧泵三，设定压力为﹣1000Pa，使解吸液流出，动态吸附3小时后，以3000r/min离心10min，取上清液即为高F值金枪鱼寡肽溶液。