[发明专利]悉生动物肥胖模型的构建方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术，特别涉及一种悉生动物肥胖模型的构建方法，及其在筛选参与肥胖发生的微生物、筛选预防和治疗肥胖的微生物以及食品、配方、药物、营养品、保健品、饮料中的应用。

背景技术

人的身体内生活着大量共生微生物，其地位与作用相当于后天获得的一个重要“器官”，对人类健康发挥不可替代的作用，作为一个完整的人体，真核细胞仅占细胞总数的10％，而90％是原核细胞，因此诺贝尔奖获得者莱德伯格提出人体是由真核细胞与体内共生的原核细胞共同组成的“超级生物体”，共生的微生物种类超过1000种以上，总重量达到1-2公斤，细胞总数约10¹⁴个，是人体自身细胞的10倍，其编码的基因数量至少是人体自身基因的100倍。众所周知，肥胖已经成为现代社会日益严重的公共健康问题，然而，到目前为止，肠道菌群参与肥胖、胰岛素抵抗等代谢性疾病发生发展的机理还不是很清楚，具体地说就是肠道菌群是代谢性疾病发生的原因还是结果，什么样的细菌能够导致代谢性疾病的发生，什么样的细菌能够改善肥胖、胰岛素抵抗等症状还不是很清楚。

发明内容

本发明的目的之一是，提供新型的悉生动物肥胖模型的建立方法。该方法采用在高脂饮食条件下接种内毒素(LPS)产生菌的方法构建了悉生动物肥胖模型。无菌动物饲喂高脂饮食的同时，接种一种微生物如内毒素产生菌，或其组合物后，该微生物能够在无菌动物肠道内定植，同时动物表现出肥胖、胰岛素抵抗、或慢性炎症等代谢、免疫等系统紊乱的症状。本发明还提供筛选参与肥胖发生的微生物及其组合物的新方法，为肥胖的治疗提供药物靶点的方法，并可用于进行对肥胖等代谢性疾病有预防和治疗作用的微生物、食品、配方、药物、营养品、保健品、饮料等的筛选和效果评价。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术方案：一种悉生动物肥胖模型的构建方法，在对无菌动物饲喂脂肪含量不低于5％的高脂饮食的同时，接种一种微生物或其组合物，该微生物或其组合物能够在无菌动物肠道内定植提供动物模型，动物模型表现出至少一种代谢或免疫系统紊乱的症状。

上述悉生动物肥胖模型的构建方法，其中，所述的代谢或免疫系统紊乱的症状包括肥胖、胰岛素抵抗或慢性炎症。

上述悉生动物肥胖模型的构建方法，其中，所述的无菌动物包括小鼠、大鼠、仓鼠、猪、兔子或猴子。

上述悉生动物肥胖模型的构建方法，其中，所述的高脂饮食的脂肪含量不低于10％。

上述悉生动物肥胖模型的构建方法，其中，所述的微生物包括内毒素产生菌、阴沟肠杆菌B29菌株、阴沟肠杆菌、肠杆菌属、肠杆菌科、伽马变形菌纲、变形菌门或革兰氏阴性菌。

上述悉生动物肥胖模型的构建方法，其中，所述的微生物的16S rRNA基因序列与SEQ ID NO.1的序列的相似性至少为30％、50％、75％或95％。

上述悉生动物肥胖模型的构建方法，其中，所述的微生物可为能够产生内毒素的微生物，产生的内毒素可具有内毒素活性。所使用的微生物可具有内毒素合成基因，内毒素合成基因序列与B29的内毒素合成基因序列相似性至少为30％，50％，75％，或95％。

上述悉生动物肥胖模型的构建方法，其中，接种方法包括灌胃、饲料中添加、饮用水中添加或毛皮涂抹。接种后菌株能够在动物肠道内定植或者该菌或菌的组合能够在动物粪便中持续检出。动物可以出现体重增加、脂肪增加、血脂增加、胰岛素抵抗、血清脂多糖结合蛋白、瘦素抵抗、血清炎症水平增加或组织炎性因子表达量增加等。

一种参与肥胖发生的微生物或其组合物的筛选方法，是指采用在无菌动物饲喂高脂饮食的同时，接种后能够在无菌动物肠道内定植，同时动物表现出至少一种代谢或免疫系统紊乱的症状的微生物作为对照微生物，比较受试微生物或其组合物，如果受试微生物或其组合物与对照微生物具有相似的作用，即表明受试微生物或其组合物可能参与了肥胖发生。

上述参与肥胖发生的微生物或其组合物的筛选方法，其中，代谢或免疫系统紊乱的症状包括肥胖、胰岛素抵抗或慢性炎症。

一种对代谢或免疫系统紊乱的症状有预防和治疗作用的微生物或其组合物的筛选方法，是采用表现出至少一种代谢或免疫系统紊乱的症状的动物模型，给予一种受试微生物或其组合物后，如果动物的至少一种代谢或免疫系统紊乱的症状出现好转，即表明该微生物或其组合物具有对代谢或免疫系统紊乱的症状有预防和治疗的作用。

上述对代谢或免疫系统紊乱的症状有预防和治疗作用的微生物或其组合物的筛选方法，其中，所述代谢或免疫系统紊乱的症状包括肥胖、胰岛素抵抗或慢性炎症。