[发明专利]一种猪圆环病毒2型重组亚单位疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种猪圆环病毒的2型重组亚单位疫苗，其特征在于：所述的亚单位疫苗主要由猪圆环病毒2型融合蛋白rYSORF和佛氏佐剂组成。

2.根据权利要求1所述的猪圆环病毒的2型重组亚单位疫苗，其特征在于：所述的融合蛋白rYSORF中加入的佛氏佐剂是佛氏不完全佐剂，先将纯化后的融合蛋白调至1mg/ml，按佛氏不完全佐剂与融合蛋白的体积比为1:1在搅拌状态下加入。

3.一种猪圆环病毒2型重组亚单位疫苗的制备方法，其特征在于：包括下述步骤：

1）构建人工基因YSORF:

选取猪圆环病毒2型ORF1和ORF2蛋白免疫优势区，利用生物信息学优化密码子，形成人工基因序列，命名为YSORF；设计引物，利用重叠PCR(SOE)技术拼接YSORF，该序列包含柔性肽(G₃S)₅，连接ORF1和ORF2蛋白免疫优势区；然后利用生物信息学软件Vector NTI对该序列进行密码子优化，获得人工基因YSORF序列；

2）构建重组表达载体rYSORF；

3）融合蛋白rYSORF的诱导表达；

在TB液体培养基中诱导表达，优化表达条件促进融合蛋白在上清中表达；

4）分离纯化大肠杆菌表达的猪圆环病毒2型重组蛋白；

5）利用纯化的猪圆环病毒2型融合蛋白，辅以佛氏不完全佐剂，制备成猪圆环病毒2型重组亚单位疫苗。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述步骤3）中融合蛋白rYSORF表达条件的优化是将含有人工基因YSORF的工程菌按1/500接种液体TB培养基，37℃剧烈振荡培养至OD600≈1.0时，加入诱导剂IPTG至0.05mM和表面活性剂SDS至0.05%，40℃诱导培养6小时，获得可溶性融合蛋白rYSORF。

5.一种构建人工基因YSORF，其特征在于：所述基因YSORF序列包含序列表中SEQ IDNO.1、SEQ IDNO.2和SEQ IDNO.3，且分别位于人工基因YSORF序列的上游、中部和下游。

6.一种融合蛋白rYSORF，其特征在于：所述融合蛋白rYSORF序列包含序列表中的SEQ IDNO.4、SEQ IDNO.5和SEQ IDNO.6，且位于融合蛋白rYSORF序列氨基端、中部和羧基端。