[发明专利]一种捕获核酸片段的方法

权利要求书

1.一种捕获核酸片段的方法，其特征在于，包括以下步骤：

A.以含待捕获核酸片段的核酸分子为原料，利用生物素标记的扩增引物或接头元件制备生物素标记的捕获探针；

B.使生物素标记的捕获探针与待捕获核酸片段库杂交，利用含链霉亲和素或亲和素标记的固相载体捕获所述待捕获核酸片段。

2.根据权利要求1所述的捕获核酸片段的方法，其特征在于，所述步骤B包括以下步骤：

B01.利用含链霉亲和素或亲和素标记的固相载体捕获步骤A中的生物素标记的捕获探针，得固定在固相载体上的捕获探针；

B02.使固定在固相载体上的捕获探针与待捕获核酸片段库杂交得第一次杂交产物，分离纯化第一次杂交产物得含固相载体的第一产物；

B03.使步骤B02得到的产物变性，得第一次捕获产物。

3.根据权利要求2所述的捕获核酸片段的方法，其特征在于，在所述步骤B03之后还包括以下步骤：

B04.利用在步骤B01中得到的固定在固相载体上的捕获探针与步骤B03所得的第一次捕获产物杂交得第二次杂交产物，分离纯化第二次杂交产物得含固相载体的第二产物；

B05.使步骤B04得到的产物变性，得第二次捕获产物。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的捕获核酸片段的方法，其特征在于，所述步骤B中的杂交是在周期性震动中进行的。

5.根据权利要求1至3中任一项所述的捕获核酸片段的方法，其特征在于，所述含待捕获核酸片段的核酸分子为克隆载体库；所述步骤A包括以下步骤：

A01.使用限制性酶将克隆载体库中的待捕获核酸片段酶切下来，从而获得DNA模板；

A02.片段化DNA模板，得DNA模板片段化产物；

A03.DNA模板片段化产物与生物素标记的接头元件连接，得生物素标记的捕获探针。

6.根据权利要求1所述的捕获核酸片段的方法，其特征在于，所述含待捕获核酸片段的核酸分子为克隆载体库；所述步骤A包括以下步骤：

A11.使用限制性酶将克隆载体库中的待捕获核酸片段酶切下来，从而获得DNA模板；

A12.片段化DNA模板，得DNA模板片段化产物；

A13.DNA模板片段化产物与接头元件连接，得含接头的DNA模板片段；

A14.利用生物素标记的扩增引物对步骤A13的产物进行PCR扩增，得生物素标记的捕获探针。

7.根据权利要求1至3中任一项所述的捕获核酸片段的方法，其特征在于，所述步骤A之前还包括步骤：

A00.以基因组DNA为模板，利用用于特异性扩增待捕获核酸片段的引物对进行PCR扩增，得含待捕获核酸片段的核酸分子。

8.根据权利要求1所述的捕获核酸片段的方法，其特征在于，所述步骤A包括以下步骤：

A21.片段化含待捕获核酸片段的核酸分子，得片段化产物；

A22.片段化产物与接头元件连接，得含接头的核酸片段；

A23.利用生物素标记的扩增引物对步骤A22的产物进行PCR扩增，得生物素标记的捕获探针。

9.根据权利要求1至3中任一项所述的捕获核酸片段的方法，其特征在于，所述步骤A包括以下步骤：

A31.片段化含待捕获核酸片段的核酸分子，得片段化产物；

A32.片段化产物与生物素标记的接头元件连接，得生物素标记的捕获探针。

10.根据权利要求6或8所述的捕获核酸片段的方法，其特征在于，所述的接头元件为分叉接头。

11.根据权利要求7所述的捕获核酸片段的方法，其特征在于，所述用于特异性扩增待捕获核酸片段的引物对包括：SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20中的至少一对。