[发明专利]一种快速高效的均一化全长cDNA文库构建方法在审

申请号：	201210291096.2	申请日：	2012-08-16
公开（公告）号：	CN102797044A	公开（公告）日：	2012-11-28
发明（设计）人：	罗昊澍;其他发明人请求不公开姓名	申请（专利权）人：	北京诺兰信生化科技有限责任公司
主分类号：	C40B40/08	分类号：	C40B40/08;C40B50/06;C12N15/10
代理公司：	暂无信息	代理人：	暂无信息
地址：	100193 北京市海***	国省代码：	北京;11
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摘要：
搜索关键词：	一种快速高效均一全长 cdna 文库构建方法
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【权利要求书】：

1.一种高效快速的均一化全长cDNA文库构建方法，包括mRNA的差减/均一化处理，全长cDNA的获得，二链cDNA的合成及文库的获得，其特征在于差减/均一化处理采用直接在磁珠上合成cDNA第一链后与mRNA进行杂交后，用磁珠分离法将高表达的mRNA除去得到稀有表达的mRNA；全长cDNA的获得以及二链cDNA的合成结合改进后的Oligo-capping法一步获得全长mRNA以及改进后的Cap-trapper法获得第二链cDNA。

2.如权利要求1所述的高效快速的均一化全长cDNA文库构建方法，其特征在于构建方法包括以下步骤：

1)mRNA与磁珠的结合并进行cDNA第一链的转录；

2)均一化杂交及冗余RNA的去除；

3)捕获全长mRNA并进行5′-Adapter的连接；

4)cDNA第一链的合成；

5)cDNA第二链的合成；

6)双链DNA的分级纯化；

7)双链DNA的重组；

8)重组产物的电转化；

9)菌落PCR鉴定重组克隆的阳性率。

3.如权利要求1所述的高效快速的均一化全长cDNA文库构建方法，其特征在于：cDNA第一链的合成时引入SEQ IN No.1-SEQ IN No.4序列。

4.如权利要求1所述的高效快速的均一化全长cDNA文库构建方法，其特征在于：菌落PCR鉴定重组克隆的阳性率引入SEQ IN No.5和SEQ IN No.6序列。