[发明专利]采用芥菜型油菜基因ANS和埃塞俄比亚芥BAN共转化提高大肠杆菌中原花色素含量的方法

权利要求书

1. 一种采用芥菜型油菜基因ANS 和埃塞俄比亚芥BAN 共转化提高大肠杆菌中原花色素含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）从芥菜型油菜种子的cDNA中克隆花色素合成酶ANS基因和埃塞俄比亚芥种子的 cDNA中克隆花色素还原酶BAN基因；

（2）把ANS 和BAN 基因可操作性地连接于表达调控序列，形成含ANS 和BAN基因的原核表达载体;

（3）将ANS和BAN基因同时导入BL21大肠杆菌，转化的单菌落在0.5-1.0 mL的LB液体培养基中，28-38℃，150-250rpm(转/分钟)培养6-12小时候后，再在含黑色葡萄皮提取物的LB液体培养基中，28-38℃，150-250rpm震荡培养36-54小时后，常温下，10000-12000g离心10-20min收集菌体；

（4）采用DMACA-HCl法测定大肠杆菌所含原花色素的量，筛选获得原花色素含量提高的大肠杆菌菌株。

2.根据权利要求1所述的采用芥菜型油菜基因ANS 和埃塞俄比亚芥BAN 共转化提高大肠杆菌中原花色素含量的方法，其特征是，所述的LB液体培养基中含0.2-0.8g/L的黑色葡萄皮提取物。

3.根据权利要求1或2所述的采用芥菜型油菜基因ANS 和埃塞俄比亚芥BAN 共转化提高大肠杆菌中原花色素含量的方法，其特征是，所述的黑色葡萄皮提取物提取方法是：将黑色或深红色的葡萄皮用粉碎机粉碎，过1.0 mm 的筛，将用20％-50％的甲醇(v/v)作为萃取溶剂，葡萄皮量与溶剂用量之比为1∶3-5(w/w)，萃取温度为50℃-60℃，萃取时间为3-6h；回收甲醇后的浓缩液在10000-12000g离心10-15min，过滤去渣，然后在浓缩液中加入丙酮，浓缩液与丙酮之比为1∶1-2(v/v)，搅拌混匀5-10min，，过滤除去杂质，浓缩液经回收丙酮后，在40℃-60℃下真空干燥即得葡萄皮提取物。