[发明专利]一种由动物肝脏水解得到的多肽的药物组合物及其制备方法

说明书

技术领域

 本发明涉及一种治疗肝炎、肝硬化疾病的肝水解肽药物组合物。

背景技术

肝水解肽是由健康牛、猪的肝脏经酶水解提取制得的含有多肽类、氨基酸、核酸类的物质。肝水解肽有以下主要作用：1、保肝、护肝作用：苦参碱可减少肝细胞损伤，并促进其再生，改善肝脏微循环，以利胆红素的摄取、结合与排泄，从而达到抗炎、保肝护肝以及退黄降酶的功效，最终使肝病理组织学得到明显改善；2、抗病毒：苦参碱对HBV—DNA的复制有明显的抑制作用；3、抗肿纤维化：主要通过保护肝细胞膜，抑制纤维化因子的释放，调控贮脂细胞(HSO)的功能等多个环节发挥抗肝纤维化的作用；4、双向调控免疫，有效改善病理性组织；5、抗肿瘤作用：主要通过抑制细胞膜上Nak—ATP酶并激活腺苷酸环化酶，进而抑制肿瘤细胞生长作用；同时，苦参碱还可抑制肿瘤细胞与内皮细胞的粘附，从而减少肿瘤的转移等；6、毒理试验证实苦参碱对动物呼吸系统及心血管系统无明显影响，急性毒性LD50为64.4mg／kg。长期毒性试验未发现有毒理上的病理损伤，致突变试验均为阴性，表明本品没有明显毒性。本发明人研制了一种有效成分含量高的肝水解肽原液的制备方法、药物质量稳定性高的肝水解肽药物组合物及其制备方法。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种用于治疗肝炎、肝硬化疾病、药物质量稳定性高的肝水解肽药物组合物。

肝水解肽的治疗作用主要取决于成份中的多肽，本发明药物组合物的制备过程中肝水解肽原液的制备方法可以取得较高的多肽含量，肝水解肽原液具体制备方法如下：

1、取健康的猪或牛的肝脏，去除非肝脏组织，先用0.5%的氯化钠溶液冲洗，洗净血水，再用无菌注射用水冲洗3次后绞碎。将绞碎的肝脏与注射用水按1：1.6～2.2的质量比混合，用高速组织捣碎机匀浆，将匀浆加热至45～50℃，恒温1小时。

2、用KOH将上述匀浆调pH至7.5～8.0，加肝脏质量的0.4%的胰酶，保持45～50℃，连续恒温水解8小时，期间保持pH在7.5～8.0之间。用HCL将上述水解液调pH至2.5～3.0，按每1L水解液加入4g胃蛋白酶的比例加入胃蛋白酶，保持40～45℃，水解6小时，期间保持pH在2.5～3.0之间。

3、往水解液中加入0.1%（g/ml）的活性炭，边搅拌边加热至90～95℃，保持30分钟，迅速冷却至室温，用0.45μm滤膜过滤除炭，4000rpm离心25分钟，取上清液，将上清液调pH至6.2～6.5之间，保持38～42℃放置12小时，用0.22μm滤膜过滤，10000分子量超滤膜超滤得肝水解肽原液，测定多肽含量。

本发明还提供了肝水解肽药物组合物，由肝水解肽原液、右旋糖酐40和羧甲基纤维素钠按下述包括以下步骤的方法制备而成：

1．将上述肝水解肽原液配制成水溶液，使100mL水溶液含2000mg多肽，加入右旋糖酐40和羧甲基纤维素钠，使右旋糖酐40的含量为10g/100mL和羧甲基纤维素钠的含量为0.05g/100mL，调节pH值为6.0～7.0，用超滤器过滤；

2．无菌分装于西林瓶中；

3．冷冻干燥：

①预冻：将步骤2中分装溶液半加塞置于预先降温至－30℃～－35℃冷冻箱内，保持1小时，匀速降温至－52℃～－47℃，保温3小时；

②升华：开启真空装置，控制真空度14～16Pa，匀速升温（≤1℃/min）至－30℃～－26℃；在此温度保持2小时，1小时内匀速升温至－15℃～－12℃，在此温度保持10小时；

③干燥：4小时内，匀速升温至25℃，干燥6小时，密塞轧盖，包装得肝水解肽药物组合物。

上述步骤3①中的匀速降温速度≤1℃/min；步骤3②中匀速升温至－30℃～－26℃的升温速度≤1℃/min。

发明人经过大量实验发现按照上述工艺制备肝水解肽原液跟现有技术相比具有较高的多肽含量。

本发明提供以下试验及对比结果：

      1、样品1（按照CN100542602C 方法制备的肝水解肽原液）

   2、样品2（按照CN102228676A方法制备的肝水解肽原液）

   3、样品3（按照CN101091722A方法制备的肝水解肽原液）

4、样品4（按照CN1903357B方法制备的肝水解肽原液）

   5、样品5（本发明制备的肝水解肽原液）

以上样品制备过程中的原料肝脏为同一来源，混合均匀的新鲜、健康肝脏。