[发明专利]一种从百合组织中同时提取DNA和RNA的方法

权利要求书

1.一种从百合组织中同时提取DNA和RNA的方法，其特征在于它包括以下步骤：

（1）取0.5-1g百合植物组织，加入液氮研磨成粉末，按每克组织材料添加12-15ml的异硫氰酸胍提取缓冲液的比例加入预冷的异硫氰酸胍提取液，充分震荡混匀，冰浴10-15min，再加入提取液1/10体积的pH4.5-5.5、3mol L^-1醋酸钠，颠倒混匀；其中异硫氰酸胍提取缓冲液成分为：4.5mol L^-1 异硫氰酸胍，25mmol L^-1柠檬酸钠，0.5%（w/v）十二烷基肌氨酸钠，3%（w/v）可溶性聚乙烯吡咯烷酮，使用前每100mL提取缓冲液加入1mL β-巯基乙醇；

（2）在步骤（1）得到的混合液中加入与提取液等体积的氯仿，剧烈震荡混匀，冰上放置5min后于4℃ 12000g离心10min，取上清置于新的离心管中，重复此步骤一次；

（3）向步骤（2）中得到的上清液中加入1/3提取液体积的pH4.5-5.5、8mol L^-1预冷醋酸钾，颠倒混匀，冰上放置10min， 4℃ 12000g离心10min，取上清置于新的离心管中，重复此步骤一次；

（4）向步骤（3）得到的上清液中加入与提取液等体积的异丙醇，混匀后-20℃放置30min，接着4℃ 12000g离心10min，得到核酸粗提沉淀物；

（5）用75%的乙醇清洗沉淀两次，室温下干燥20min，用0.5-1mL DEPC处理过的ddH₂O彻底溶解沉淀；

（6）在步骤（5）得到的总核酸溶液中加入0.5-1mLTris饱和酚/氯仿混合液，Tris饱和酚/氯仿混合液中Tris饱和酚与氯仿的体积比为1:1，剧烈震荡混匀，冰上放置5min，于4℃ 12000g离心10min，取上清置于新的离心管中；

（7）向步骤（6）的上清液中加入0.5-1mL氯仿，剧烈震荡混匀，冰上放置5min，4℃ 12000g离心10min，取上清置于新的离心管中；

（8）向步骤（7）的上清液中加入0.125-0.25mL 10mol L^-1氯化锂，混匀后加入0.25-0.5mL无水乙醇，上下颠倒混匀后-20℃放置2h沉淀RNA，4℃ 14000g离心15min，取上清液置于新的离心管中；

（9）用75%的乙醇清洗步骤（8）得到的RNA沉淀两次，室温下干燥10min，用60-100μL DEPC处理过的ddH₂O溶解RNA沉淀，-80℃保存备用； 

（10）向步骤（8）得到的上清液中加入0.875-1.75mL异丙醇和0.0875-0.175mL pH4.5-5.5的3mol L^-1醋酸钠，混匀后-20℃放置30min沉淀DNA，室温下12000g离心15min，得到DNA沉淀，用75%乙醇清洗两次，在室温下干燥10min，用60-100μL TE缓冲液溶解，于-20℃保存备用。

2.如权利要求1所述的从百合组织中同时提取DNA和RNA的方法，其特征在于：百合植物组织为野生岷江百合幼嫩鳞片、东方百合品种西伯利亚幼嫩叶片、通江百合的幼嫩根中的一种。