[发明专利]一种从百合组织中同时提取DNA和RNA的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物分子生物学技术领域，具体涉及从百合组织中同时提取DNA和RNA的方法，尤其是从百合鳞片中同时提取DNA和RNA的方法。

背景技术

提取较高质量的DNA和RNA是分子生物学实验研究的一项最基本工作，使用一种简便、高效的核酸提取方法对提高实验效率很有必要。目前，植物组织DNA的提取方法主要有CTAB法、SDS法、高盐低渗法等，RNA提取的主要方法有异硫氰酸胍-酚-氯仿法（一步法）、CTAB法、SDS法和热硼酸法等。这些提取方法的步骤基本相似，首先充分破碎植物细胞的细胞壁，接着使核蛋白复合体中的蛋白充分变性，实现核蛋白与核酸的分离；同时抑制内源和外源核酸酶的活性，防止核酸污染被降解，然后将DNA和RNA与多糖、多酚等杂质分离，得到纯净的DNA或RNA，最后进行质量检测。目前，常规的核酸提取方法或使用的试剂盒大都是针对单独的DNA或RNA进行提取，较少有用一种方法同时提取植物组织中的DNA和RNA。

百合等植物中富含大量的多糖类物质和酚类化合物，同时还含有较多的成分确定或不确定的次生代谢物。酚类化合物在匀浆和提取过程中极易被氧化成醌类物质，与核酸发生不可逆结合，严重影响核酸的分离纯化。多糖的许多理化性质与核酸相似，在提取过程中与核酸共沉淀，很难将它们分离。在植物生长发育过程中，包括DNase和RNase在内的各种水解酶大量积累，同时各种次生代谢物质大量积累，给植物组织中核酸的提取带来极大的困难。近年来，有关从富含多糖多酚及次生代谢物质的植物组织中提取DNA或RNA的方法已有较多报道。葛晓萍等利用CTAB-LiCl法从苹果和草莓的一些组织中提取到总RNA（一种适合多糖、多酚植物的RNA提取方法。青岛科技大学学报，2007，28：6-8）。郭书巧等也利用CTAB-LiCl法从甜叶菊中成功的分离了甜叶菊的总RNA（甜叶菊RNA分离方法研究。基因组学与应用生物学，2009，28：101-104）。贾晋等确定了SDS法为提取盐爪爪核酸的最佳方法，同时增加了LiCl和无水乙醇特异沉淀步骤，用于RNA的提取（盐爪爪核酸提取方法研究。中国农学通报，2010,26:49-52）。陈肃等通过无水乙醇对植物材料的预处理，用CTAB-LiCl-无水乙醇法从一些木本植物组织中得到了质量合格的RNA（一种快捷有效的提取树木RNA方法。辽宁林业科技，2008,05:25-27）。尹慧等采用改进了的CTAB从百合叶片中成功的提取了总RNA（百合叶片总RNA提取方法比较及优化。中国农业大学学报，2008，13:41-45）。杜中军等采用改进的SDS法，结合使用无水乙醇和醋酸钾除去多糖，从富含多糖的芒果组织中提取到完整的总RNA（一种改进的富含多糖的芒果组织中完整总RNA的提取方法。植物生理学通讯，2005,41:202-204）。杨秀梅等采用CTAB法提取百合鳞片基因组DNA，用去多糖缓冲液除去多糖，得到了高质量的基因组DNA（百合鳞片DNA的提取及RGA-PCR体系的优化。西南农业学报，2011，24：266-269）。侯思名等利用加入了抗氧化剂和高盐溶液的CTAB法成功提取了苎麻组织的DNA（苎麻总DNA提取的CTAB法优化方案。西北植物学报，2005,25:2193-2197）。占亚光等采用改良的CTAB法从白桦成熟叶片中提取了质量较好的DNA（富含多糖的白桦成熟叶片DNA的提取方法。东北林业大学学报，2005,33:24-25）。

对于同时从一种植物组织中提取DNA和RNA的方法，一些文献也有所报道。黄真池等利用钙盐分级沉淀法从尾叶桉叶片中得到了完整的DNA和RNA（一种木本植物RNA和DNA的简捷提取方法。湖北农业科学，2010,49:773-774）。魏利斌等采用CTAB法同步提取了芝麻中的DNA和RNA（芝麻DNA和RNA同步提取方法。分子植物育种，2008,06:1025-1030）。刘胜洪等利用高盐低pH的缓冲液提取核酸，再用LiCl选择性沉淀RNA，从猕猴桃组织中分离得到了DNA和RNA（一种高效提取猕猴桃DNA和RNA的方法。生物技术通报，2011,09:171-175）。王伶平等利用CTAB法提取山药总核酸，然后总核酸溶液一分为二，一份用于分离RNA，另一份用于分离DNA（一种同时提取植物DNA和RNA的方法。CN101486747B）。