[发明专利]一种鉴定水稻低植酸突变体zju-lpa2杂交后代基因型的引物及方法

权利要求书

1.一种引物，其特征在于，为引物ZHJ1、引物ZHJ2或它们的组合；其中，引物ZHJ1的碱基序列为：

正向引物序列：5’-TCCTTTAGTCTAGGACCGTTGG-3’；

反向引物序列：5’-AGCCGCTTCTTGGAGTGAT-3’

和5’-ACCAGGGATGCCGTTGAG-3’；

引物ZHJ2的碱基序列为：

正向引物序列：5’-AGCCGCTTCTTGGAGTGAT-3’

和5’-ACCAGGGATGCCGTTGAG-3’；

反向引物序列：5’-AGCCGCTTCTTGGAGTGAT-3’。

2.一种鉴定水稻低植酸突变体zju-lpa2杂交后代基因型的方法，包括：

(1)提取水稻样品苗期叶片总DNA；

(2)以所述总DNA为模板，利用权利要求1所述的引物进行PCR扩增，扩增产物经凝胶电泳分离，染色后拍照成像；

(3)根据成像结果，判断水稻样品的基因型；

当利用引物ZHJ1进行PCR扩增，如果只出现350bp特征带，则该水稻样品为含低植酸基因ZJU-LPA2的纯合型材料，如果只出现498bp特征带，则该水稻样品为不含低植酸基因ZJU-LPA2的纯合型材料，如果同时出现350bp和498bp特征带，则该水稻样品为含低植酸基因ZJU-LPA2的杂合型材料；

当利用引物ZHJ2进行PCR扩增，如果只出现754bp特征带，则该水稻样品为含低植酸基因ZJU-LPA2的纯合型材料，如果只出现498bp特征带，则该水稻样品为不含低植酸基因ZJU-LPA2的纯合型材料，如果同时出现754bp和498bp特征带，则该水稻样品为含低植酸基因ZJU-LPA2的杂合型材料；

当利用引物ZHJ1和引物ZHJ2进行PCR扩增，如果只出现350bp和754bp特征带，则该水稻样品为含低植酸基因ZJU-LPA2的纯合型材料，如果只出现498bp特征带，则该水稻样品为不含低植酸基因ZJU-LPA2的纯合型材料，如果同时出现350bp、754bp和498bp特征带，则该水稻样品为含低植酸基因ZJU-LPA2的杂合型材料；

所述的低植酸基因ZJU-LPA2的碱基序列如SEQ ID NO.1所示。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，采用CTAB法提取总DNA。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系为20μL，其中，2×PCR Master Mix缓冲液10μL、10μM正反向引物各0.4μL、总DNA1μL、无菌水补足至20μL。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应程序为：94℃预变性4min；94℃变性30s，57℃退火45s，72℃延伸1min，35个循环；最后72℃延伸7min。