[发明专利]一种鼠源IL-27重组蛋白真核表达载体及构建方法

权利要求书

1.一种鼠源IL-27重组蛋白真核表达载体pSZ12，如序列表SEQ ID No.8所示。

2.一种鼠源IL-27重组蛋白真核表达载体的构建方法，包括下列步骤：

第1、设计引物

引物PRM-149如序列表SEQ ID No.1所示，包含了KpnI酶切位点和EBI3的5’端编码序列的一部分；

引物PMR-150如序列表SEQ ID No.2所示，包含了(GGGS)4链编码序列、EBI3的3’端编码序列的一部分和p28的5’端编码序列的一部分；

引物PMR-151如序列表SEQ ID No.3所示，包含了p28的5’端编码序列的一部分；

引物PMR-152如序列表SEQ ID No.4所示，包含了p28的3’端编码序列的一部分，6×组氨酸编码序列，终止密码子以及XhoI酶切位点；

第2、扩增关键片段pSZ12-insert

首先提取IFN-γ+CpG刺激的小鼠树突状细胞的总RNA，逆转录酶反转成cDNA，以此为模板，以引物PRM-149和PRM-150扩增出片段pSZ12-L，如序列表SEQ ID No.5所示，以引物PRM-151和PRM-152扩增出片段pSZ12-R，如序列表SEQ ID No.6所示；

然后以纯化后的pSZ12-L和pSZ12-R为模板，以PRM-149和PRM-152为引物做SOEPCR，扩增出关键片段pSZ12-insert，如序列表SEQ ID No.7所示；

第3、将pSZ12-insert和pcDNA3.1+载体用KpnI+XhoI双酶切并纯化后用T4连接酶连接，转化大肠杆菌感受态细胞，涂布氨苄抗性LB培养基平板；

第4、鉴定质粒pSZ12

挑取单克隆，氨苄抗性液体LB培养基培养并提质粒，酶切鉴定并测序鉴定。

3.引物PRM-149如序列表SEQ ID No.1，PRM-150如序列表SEQ ID No.2，PRM-151如序列表SEQ ID No.3，PRM-152如序列表SEQ ID No.4。

4.一种鼠源IL-27重组蛋白真核表达载体pSZ12中的关键片段pSZ12-insert的序列，如序列表SEQ ID No.7所示。

5.EBI3和p28的连接链(GGGS)4的编码DNA序列，如序列表SEQ ID No.9所示。