[发明专利]荧光分子修饰的纳米银探针及其试剂盒与在检测链霉亲和素中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种荧光分子修饰的纳米银探针及其试剂盒与在检测链霉亲和素中的应用。

背景技术

金属纳米粒子和其他纳米结构能够用来增强荧光强度和提高荧光检测的灵敏度。当荧光分子靠近金属表面时，能使荧光分子的荧光特性改变，产生金属荧光增强的效应。这种由金属纳米结构所导致的荧光增强效应可以解释为：1.近场增强所致的外来光吸收增强和纳米粒子散色所致的发射增强；2.纳米粒子表面的荧光分子的放射性衰变速度改变所致的荧光寿命和量子产率变化。该荧光增强效应与纳米粒子的形状和尺寸相关，也与荧光分子和纳米粒子之间的距离相关。最佳的荧光分子-金属表面的距离是8nm。银纳米粒子和岛状银膜已被用来增强荧光分子的荧光强度从而提高荧光检测的灵敏度。由于入射光带来的表面等离子体激发产生的强等离子体吸收带和增强的局域电磁场，使得金属纳米粒子具有极佳的光学性质。局域表面等离子共振传感器已经用于免疫分析、生物分子检测、表面增强拉曼散射和金属荧光增强中。但是，基于局域表面等离子共振所产生的金属荧光增强效应是有限的，而且对不同的荧光分子的荧光增强能力也是有局限性的。此外，在基于金属荧光增强效应的传感器制备过程中，涉及到复杂的合成技术。因此，在金属荧光增强领域中，一个简单高效的金属荧光增强传感器具有很大的吸引力。

发明内容

本发明所要解决的技术问题，是提供一种灵敏的荧光增强技术并适用于蛋白质链霉亲和素（SA）检测的荧光分子修饰的纳米银探针。

本发明还要解决的技术问题，是提供包含上述纳米银材料的试剂盒，用于SA的检测。

本发明最后要解决的技术问题，是提供上述试剂盒在检测SA中的应用。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种荧光分子修饰的纳米银探针，它以直径为10~30nm的纳米银球为内核，银球外表面键合有荧光分子链和寡核苷酸链；

其中，所述的荧光分子链为5’-SH-AAAAA AAAAA AAAAA AAAAA AAAA-荧光分子；所述的荧光分子为Cy3或Cy5；

其中，所述的寡核苷酸链为：5’-SH-AAAAAAAAAAAAAAA-生物素。

上述的荧光分子修饰的纳米银探针的制备方法，它包括如下步骤：

(1)在冰浴条件下，将2-20mmol/L硝酸银溶液逐滴加入至3-30mmol/L硼氢化钠溶液中，硝酸银与硼氢化钠的反应摩尔比为1：3，不断搅拌至反应完全，然后补加硼氢化钠溶液，补加的硼氢化钠的摩尔量为上述参与反应的硼氢化钠的摩尔量的7%，继续搅拌至室温，得到纳米银溶液；

(2)将荧光分子链和寡核苷酸链按摩尔比(1~99):(1~9)加入步骤(1)得到的纳米银溶液中，静置10~24小时，荧光分子链和寡核苷酸链的总摩尔量与纳米银摩尔量之比为(100-1000):1；

所述的荧光分子链，其核苷酸序列为：5’AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA，其5’端由巯基修饰，3’端由荧光分子修饰，所述的荧光分子为Cy3或Cy5；

所述的寡核苷酸链，其核苷酸序列为：5’AAAAAAAAAAAAAAA3’，其5’端由巯基修饰，3’端由生物素标记；

(3)向步骤(2)得到的混合体系中加入1×PBS缓冲溶液，使得混合体系中的PBS缓冲溶液的浓度为0.1×PBS，静置3~10小时；

(4)向步骤(3)得到的混合体系中加入1~5mol/L氯化钠溶液，静置2~4小时，重复加入氯化钠溶液与静置的步骤1~4次，使得氯化钠的终浓度为0.1~0.3mol/L；

(5)将步骤(4)得到的混合体系静置24~72小时，取上清液；

(6)将步骤(5)得到的上清液经离心去除上清，取沉淀加入1×PBS缓冲溶液重悬，重复离心与重悬的步骤2~4次，PBS缓冲溶液每次的加入体积为待加入的混合体系体积的0.1~5倍；最后离心得到的沉淀用1×PBS缓冲溶液重悬即得备用探针。

步骤(2)中，荧光分子链和寡核苷酸链摩尔比优选为(1~10):(1~10)，最优选为3:1；静置时间优选为15~20h，最优选为18h；荧光分子链和寡核苷酸量的总摩尔量与纳米银摩尔量之比优选为（200~300）:1，最优选为288:1。