[发明专利]一种安全快速提取茶树老叶片基因组DNA的方法

权利要求书

1.一种安全快速提取茶树老叶片基因组DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将茶树叶片于液氮研磨至粉末状，再加入800μL预热DNA提取缓冲液，摇匀后于65℃水浴30min；所述DNA提取缓冲液由1.5％(w/v)SDS(pH 5.5)，100mmol/L Tris-HCl(pH8.0)，40mmol/L EDTA(pH8.0)，1mol/L NaCl，2.5％PVP，10mmol/L β-巯基乙醇组成；所述茶树叶片为新鲜的茶树老叶片；

(2)加入125μL 5mol/LKAC，摇匀后冰浴20min；

(3)待反应充分后，1.2×10⁴r/min离心3min，将上清液加入吸附柱中并装入收集管，1.2×10⁴r/min离心1min；

(4)将上述收集管中滤液再次加入吸附柱中并装入收集管，1.2×10⁴r/min离心1min，弃废液；

(5)向吸附柱加入800μL的70％乙醇，1.2×10⁴r/min离心1min，弃废液；

(6)再次加入800μL的70％乙醇，1.2×10⁴r/min离心1min，弃废液；

(7)重新将吸附柱装入收集管中，1.2×10⁴r/min离心3min，除去剩余乙醇；

(8)取出吸附柱，于50℃放置5min；

(9)将吸附柱放入新离心管中，加入60μL TE，于40℃放置5min，1.2×10⁴r/min离心3min；离心管中液体为提取的茶树基因组DNA。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，液氮研磨后迅速加入DNA提取缓冲液。