[发明专利]心肌梗塞易感性无创检测试剂盒（IL-6等基因）

权利要求书

1.一种筛查心肌梗塞高危人群的基因无创检测试剂盒，其特征在于：检测APOE基因上ε2ε3ε4 (rs429358,rs7412)、ACE基因上I/D (rs4646994)、IL-6基因上C-572G (rs1800796)的3个单核苷酸多态性位点基因型的特异性引物与DNA测序引物、Taq酶、dNTP混合液、反应缓冲液、SAP酶、ExoI酶、BigDye mix、EDTA溶液、70%乙醇溶液、100%乙醇溶液、HIDI溶液、ddH₂O等。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的特异性引物对是指针对APOE基因上ε2ε3ε4 (rs429358,rs7412)、ACE基因上I/D (rs4646994)、IL-6基因上C-572G (rs1800796)的3个单核苷酸多态性位点，能特异性扩增出包含这3个SNPs位点的DNA片段的引物对。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的DNA测序引物是针对APOE基因上ε2ε3ε4 (rs429358,rs7412)、ACE基因上I/D (rs4646994)、IL-6基因上C-572G (rs1800796)的3个单核苷酸多态性位点而设计，能通过DNA测序技术特异性检测出上述3个SNPs位点基因型的DNA测序引物。

4.根据权利要求1所示的试剂盒，其特征在于，所含的3对特异性引物序列如下：

（1）APOE（ε2ε3ε4）正向引物：5' AAATCGGAACTGGAGGAACAA3'

APOE（ε2ε3ε4）反向引物：5'TGCCCATCTCCTCCATCC3'

（2）ACE（I/D）正向引物：5'CTGGGCAACAGAGTGAGACC3'

ACE（I/D）反向引物：5'ACCCAAGTGCCAGTGATGTT3'

（3）IL-6 (C-572G) 正向引物：5'CAGCAGCCAACCTCCTCTAA3'

     IL-6 (C-572G) 反向引物：5'CCAAGCCTGGGATTATGAAG3'。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所含的3条DNA测序引物序列如下：

（1）APOE（ε2ε3ε4）测序引物：5'AAATCGGAACTGGAGGAACAA3'

（2）ACE（I/D）测序引物：5'CTGGGCAACAGAGTGAGACC3'

（3）IL-6 (C-572G)测序引物：5' CAGCAGCCAACCTCCTCTAA3'。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于试剂盒的组分和含量包括：

（1）PCR反应体系：10×PCR反应缓冲液2.5ul，25mM dNTP混合液0.2ul，5U／ul Taq DNA聚合酶 0.125ul，20uM特异性引物对，每条引物各0.25ul，ddH₂O 19.175ul；

（2）PCR产物纯化体系：1 U／ul SAP酶0.75ul，10 U／ul ExoI酶0.375ul，ddH₂O 3.875ul；

（3）测序反应体系：25% BigDye mix1ul，3.2uM DNA测序引物1ul，125mM EDTA溶液1ul，100%乙醇溶液15ul，70%乙醇溶液30ul，HIDI溶液8ul，ddH₂O 2ul。

7.本试剂盒供一人份检测应用，试剂盒的保存温度为-20℃。