[发明专利]心肌梗塞易感性无创检测试剂盒（IL-6等基因）

说明书

技术领域

本项目属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体涉及一种心肌梗塞易感基因检测试剂盒，根据检测结果从基因层面评估心肌梗塞发病的风险级别，并作为预防和治疗心肌梗塞的方向指导。

背景技术

心肌梗塞是一种急性的且会引起生命危险的心脏状态。其病因是由于部分心肌的血液循环中断而使相应心肌出现严重的持久性急性缺血，从而最终导致心肌缺血性坏死。其临床症状可表现为胸骨后剧烈疼痛、不适、晕眩等，并出现心律失常、休克和心力衰竭等现象，有时甚至会丧失知觉。在发展中国家心肌梗塞仍是最大的死亡原因之一，发生后一年内的死亡率约为50%。因此开发出一种便捷、高效的心肌梗塞易感性检测技术将对于预防和治疗心肌梗塞具有积极的意义。目前已经有研究表明血管紧张素转化酶(ACE)和载脂蛋白E(ApoE)等基因的单核苷酸多态性均与心肌梗塞的易感性有直接关联，在预防和治疗心肌梗塞中具有一定的预测价值。

肾素-血管紧张素系统在心血管系统中起着举足轻重的作用，而ACE是肾素-血管紧张素系统的重要成分，负责将血管紧张素I转化为有生物活性的血管紧张素II，能影响心肌和血管平滑肌细胞的增殖。ACE第16内含子中由287个碱基对组成的Alu重复序列的存在（I）或缺失（D）被称为插入/缺失（I/D）多态性。ACE的DD基因型可导致较高水平的血管紧张素II并引起心律失常。在中国汉族人群中已经发现心肌梗死患者ACE基因的DD基因型和D等位基因频率均显著高于正常人，被认为是心肌梗塞的一个独立危险因素。另外在2型糖尿病患者中也发现心肌梗塞并发者的DD纯合子频率显著增高，认为该基因型是心肌梗塞的风险因子。

ApoE是由299个氨基酸构成的含磷脂糖蛋白，是血浆脂蛋白的重要组成部分并直接参与胆固醇代谢。ApoE主要有ε2、ε3和ε4三种等位基因，分别编码E2、E3和E4三种不同的异构体。许多研究表明在心肌梗塞患者中ApoEε4/ε3基因型和ε4等位基因频率均显著高于正常人群。因此，ApoEε4等位基因被认为是心肌梗塞的重要遗传标记。至于ApoEε4对心肌梗塞的具体作用机制尚不清楚，初步认为是由于改变了血脂水平所导致的。在心肌梗塞中，ApoEε4等位基因与ACE基因D等位基因有协同关系。

综上所述，鉴于ACE基因和ApoE基因在心肌梗塞疾病中体现出来的疾病显著相关性，可以通过检测这些心肌梗塞发生相关基因单核苷酸位点基因型来及时筛查出易患心肌梗塞的高危人群，从而有针对性地预防和治疗，这对于降低心肌梗塞的发病率有非常重要的意义。

发明内容

基于APOE基因上ε2ε3ε4 (rs429358,rs7412)、ACE基因上I/D (rs4646994)、IL-6基因上C-572G (rs1800796)的3个单核苷酸多态性位点基因型可用来评估心肌梗塞发病风险级别，本发明提供一种心肌梗塞基因无创检测试剂盒。

该试剂盒包括：

检测APOE基因上ε2ε3ε4 (rs429358,rs7412)、ACE基因上I/D (rs4646994)、IL-6基因上C-572G (rs1800796)的3个单核苷酸多态性位点基因型的特异性引物对及DNA测序引物。

PCR反应组件（包括Taq酶、dNTP混合液、反应缓冲液、ddH2O等）。

PCR产物纯化组件（包括SAP酶、ExoI酶、ddH2O等）。

DNA测序反应组件（包括BigDye mix，EDTA溶液、100%乙醇溶液、70%乙醇溶液、HIDI溶液、ddH2O等）。

本发明试剂盒的组分和含量包括：

PCR反应体系：10×PCR反应缓冲液 2.5ul；25mM dNTP混合液0.2ul；5U/ul Taq DNA聚合酶0.125ul；20uM特异性引物对（每条引物各0.25ul）；ddH2O 19.175ul。

PCR产物纯化体系：1U/ul SAP酶 0.75ul；10U/ul ExoI酶0.375ul；ddH2O 3.875ul。

测序反应体系：25%BigDye mix 1ul；3.2uM DNA测序引物1ul；125mM EDTA溶液1ul；100%乙醇溶液 15ul；70%乙醇溶液30ul；HIDI溶液8ul；ddH2O 2ul。

本试剂盒供一人份检测使用，试剂盒的保存温度为-20℃。

具体实施方式