[发明专利]梅毒螺旋体IgM抗体胶体金法检测试剂及其制备方法

权利要求书

1.一种梅毒螺旋体IgM抗体胶体金法检测试剂，其特征在于该试剂包括金结合物垫（3）、硝酸纤维素反应膜（4）、样品垫（2）、吸水纸（5）和PVC背衬（1）；将样品垫、金结合物垫、硝酸纤维素反应膜和吸水纸顺次相互叠压粘附于PVC背衬上；样品垫叠压金结合物垫2-3mm，金结合物垫叠压硝酸纤维素反应膜2-3mm，吸水纸叠压硝酸纤维素反应膜2-3mm；金结合物垫上包被了抗人IgM单克隆抗体-胶体金的结合物，硝酸纤维素反应膜质控区（7）和检测区（6）位置上分别包被了羊抗鼠IgG抗体或兔抗鼠IgG抗体和特异性的基因重组梅毒螺旋体抗原。

2.根据权利要求1所述的梅毒螺旋体IgM抗体胶体金法检测试剂，其特征在于：所述的样品垫是包被了葡萄球菌A蛋白(SPA)的玻璃纤维素膜或聚酯纤维膜。

3.根据权利要求1所述的梅毒螺旋体IgM抗体胶体金法检测试剂，其特征在于：所述检测区包被的梅毒螺旋体抗原为纯化的特异性基因重组抗原。

4.根据权利要求1所述的梅毒螺旋体IgM抗体胶体金法检测试剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

A：制备抗人IgM单克隆抗体：取多份正常人血清，混合，经透析、离心、纯化制得纯度达95%的IgM抗体，以人IgM作为抗原，经脾内注射免疫6-8周龄雌性BALB/c小鼠，取小鼠的免疫脾细胞与骨髓瘤细胞融合，选择性培养、筛选及克隆化获得杂交瘤细胞，将杂交瘤细胞接种于BALB/c小鼠腹腔制备腹水，以亲和层析法提纯鼠抗人IgM单克隆抗体；

B：制备多克隆抗体：以步骤A所制备的鼠抗人IgM单克隆抗体免疫山羊或兔，取血清纯化后提取到羊抗小鼠IgG多克隆抗体或兔抗小鼠IgG多克隆抗体；

C：制备胶体金：采用柠檬酸三钠还原法制得粒径20～40nm的胶体金颗粒；

D：制备鼠抗人IgM 单克隆抗体-胶体金结合物：用0.1M碳酸钾调节胶体金溶液pH值至最佳标记pH值，按照0.010～0.030 mg蛋白/mL胶体金的比例加入鼠抗人IgM单克隆抗体，混匀静置，高速离心，弃上清，所得沉淀以十分之一初始胶体金体积的金结合物保存液溶解，制得鼠抗人IgM单克隆抗体-胶体金结合物；其中，金结合物保存液为含2～5%的牛血清白蛋白的pH值为8.0～8.2的0.01～0.02M Tris-HCl缓冲液，并含1～4%的蔗糖、0.5%～1%的酪蛋白钠、1～2%的Tween-20和万分之五的叠氮钠；

E：制备样品垫：将葡萄球菌A蛋白(SPA)以稀释液稀释至0.5mg～2 mg/mL，均匀喷涂在玻璃纤维素膜或聚酯纤维酸膜上，充分干燥，其中，稀释液为含1～2%海藻糖的pH值为7.2～7.6的0.02～0.05M PBS溶液，并含1～2%的牛血清白蛋白；

F：制备金结合物垫：将步骤D所制备的鼠抗人IgM单克隆抗体-胶体金结合物均匀包被到玻璃纤维膜上，充分干燥；

G：制备硝酸纤维素膜反应膜：将羊抗小鼠IgG多克隆抗体或兔抗小鼠IgG多克隆抗体和重组梅毒螺旋体抗原分别包被在硝酸纤维素膜的质控区和检测区位置，充分干燥；

H：将样品垫、金结合物垫、硝酸纤维素反应膜和吸水纸顺次相互叠压粘附于PVC背衬上；样品垫叠压金结合物垫2-3mm，金结合物垫叠压硝酸纤维素反应膜2-3mm，吸水纸叠压硝酸纤维素反应膜2-3mm；得到试纸板，将试纸板按照需求切割成不同宽度的试纸条。