[发明专利]一株产2-苯乙醇酵母菌株及其培养方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一株产2-苯乙醇酵母菌株及其培养方法与应用，属于微生物技术领域。 

背景技术

2-苯乙醇也称β-苯乙醇，是一种具有玫瑰香气的芳香醇，天然存在于多种植物叶、花及提取的精油中，在面包、果酒、干酪及酱油等发酵食品中含量丰富。2-苯乙醇是玫瑰香型香气的主要成分，也是多种香型的补充成分，其衍生酯类如乙酸苯乙酯也是重要芳香产品。目前全球2-苯乙醇的产量超过万吨，其中大多数采用化工合成法，只有少量从植物精油中萃取。化工合成法成本较低，但合成所用原料苯或苯乙烯属于致癌物，对人体健康及环境有害。另外，化学合成2-苯乙醇中常含难以除去的联二苯、2-氯代乙苯等副产物，呈不悦气味，对产品质量及使用安全造成不良影响。因此，人们钟爱源于生物合成的2-苯乙醇，主要通过动植物原料提取或微生物转化法获得。但每5吨鲜玫瑰花才可制取约1千克玫瑰精油，生产成本高，周期长，产量远不能满足消费需求。因而，微生物转化法成为一条经济有效地生产途径。 

在酵母细胞中，2-苯乙醇可以通过合成芳香族氨基酸的莽草酸途径合成，或通过艾氏途径（Ehrlich pathway）合成（赵修报，唐育岐，刘天明等.β-苯乙醇的研究进展[J].中国酿造，2011,8:1-4.）。多种酵母具有合成2-苯乙醇的能力，如产朊球拟酵母、马克斯克鲁维酵母、发酵毕赤酵母、乳酸克鲁维酵母、酿酒酵母及异常汉逊酵母等。少数真菌也具有合成2-苯乙醇的能力，如针层孔菌、安息香薄皮层菌、帚状地霉、猴头菌及黑曲霉等，但2-苯乙醇产率极低。酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）因具有食用安全、2-苯乙醇产率高等优势而成为国内外持续研究开发的重点对象。崔志峰（崔志峰，车智博，杨霄等.2-苯乙醇耐受性高产酵母菌株的选育[J].浙江工业大学学报，2008（36）：427-430.）和Etschmann M（Etschmann M,Bluemkee W,Sell D,et al.Biotechnological production of2-phenylethanol[J].Appl Microbiol Biotechnol,2002,59:1-8.）分别报道了酵母菌株单相分批发酵生产2-苯乙醇的方法，但整体来说，2-苯乙醇的合成成本仍然较高，上述研究结果获得的酵母菌株仍难以满足市场的需求，因此寻找更高产2-苯乙醇微生物菌株仍是解决上述问题的关键。 

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一株产2-苯乙醇酵母菌株及其培养方法与应用。 

一株酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）WHH6菌株，2010年12月20日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，菌种保藏编号为CGMCC No.4491。 

上述酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）WHH6菌株是从山东省济南市长清区农家自然发酵葡萄酒缸中分离，并经紫外诱变筛选获得。该菌株菌落呈白色，边缘圆整，中央稍隆起，细胞近圆形，平均大小15～21μm×14～16μm(长×宽)，发酵产香味浓，产乙醇可达9.8%（V/V），酵母菌株对2-苯乙醇有较好耐受性。在水相培养基中当2-苯乙醇浓度为3.5～ 4.5g/L时，菌体OD₆₀₀值为对照的70%～60%。在双相培养基中2-苯乙醇产量可达到5.8564g/L。可以作为2-苯乙醇、葡萄酒和饲料酵母生产菌种应用。 

上述酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）WHH6菌株的培养方法，步骤如下： 

（1）从试管斜面挑取1～2环酿酒酵母WHH6接入液态种子培养基，在28～30℃、120～160r/m条件下，活化振荡培养16～20h，制得活化后的液态种子； 

（2）将步骤（1）制得的液态种子按照8～12%（v/v）的接种量接种于液体发酵培养基，在28～30℃、120～160r/min条件下，培养50～60h，即得。 

根据本发明优选的，所述步骤（1）中液态种子培养基组分如下： 

酵母粉10g/L、蛋白胨20g/L、葡萄糖20g/L，pH6.0，蒸馏水定容。 

根据本发明优选的，所述步骤（2）中液体发酵培养基组分如下： 

葡萄糖80.0g/L、L-苯丙氨酸35.0g/L、蛋白胨10.0g/L、酵母粉5.0g/L，pH5.5，蒸馏水定容。