[发明专利]一种乳制品中酵母β-葡聚糖的检测方法

权利要求书

1.一种乳制品中酵母β-葡聚糖的检测方法，包括下列步骤：

a)样品前处理

i)称样

在50mL高速离心管中称取待测液体样品25.0000x N g，其中固体样品5.0000x Ng加超纯水至25.0000x N g，充分溶解；

ii)沉淀

加入5x N mL 20%乙酸锌溶液和5x N mL 10%亚铁氰化钾溶液，充分振荡混合后于5500g离心10min，去掉上清液；

iii)水洗

沉淀物加15x N mL超纯水，玻璃棒搅匀，用10x N ml超纯水冲洗玻璃棒，振荡混合均匀后，于5500g离心10min，去掉上清液；

iv)醇洗

沉淀物加15x N mL 75%乙醇，玻璃棒搅匀，用10x N mL 75%乙醇冲洗玻璃棒，震荡混合均匀后，于5500g离心10min，去掉上清液；

v)二次水洗

沉淀物再加15mL x N超纯水，玻璃棒搅匀，用10mL x N超纯水冲洗玻璃棒，震荡混合均匀后，于5500g离心10min，去掉上清液；

b)标准品前处理

i)称样

在250mL SCHOTT瓶中称入0.0105g（称准至0.0002g）Sigma G5011标准品；

ii)标准品预溶

加入50mL超纯水预溶；

c)葡萄糖标准曲线制备

吸取葡萄糖标液1、3、5mL到10mL容量瓶中，用超纯水定容到刻度，得到葡萄糖为20、60、100mg/L的混合标样。在色谱条件下准确进样20uL，绘制色谱峰面积和标准物质量浓度之间的标准曲线，得出回归方程；

d)半乳糖标准曲线制备

吸取半乳糖标液1、3、5mL到10mL容量瓶中，用超纯水定容到刻度，得到半乳糖为20、60、100mg/L的混合标样。在色谱条件下准确进样20uL，绘制色谱峰面积和标准物质量浓度之间的标准曲线，得出回归方程；

e)样品及标准品水解

i)样品加酸

将a)中的步骤v)得到的沉淀物转入250mL SCHOTT瓶中，加入12x N mL盐酸（37%），加超纯水至150mL，振荡混匀；

ii)标准品加酸

在b)中的步骤ii)得到的标准品溶液中，加入12mL盐酸（37%），加超纯水至150mL，振荡混匀；

iii)水解

将SCHOTT瓶放入高压灭菌锅121℃处理60min。水解完成后马上冷却，用40%氢氧化钠，将溶液调pH到6-7，然后定容至250mL；

f)在色谱条件下检测葡萄糖、半乳糖含量；

g)结果计算

结果计算采用下式：

其中：

W：称量的牛奶样品，g；

V：样品水解后定容体积，mL；

c_葡萄糖：样品水解定容后由HPLC测定得到的葡萄糖含量，g/mL；

c_半乳糖：样品水解定容后由HPLC测定得到的半乳糖含量，g/mL；

0.9：葡萄糖换算为葡聚糖的换算因子；

F：葡聚糖水解校正因子；

C_{葡萄糖-标}：标准品水解定容后由HPLC测定得到的葡萄糖含量，g/mL；

V_标：标准品水解后定容体积，mL；

W_标：标准品称样质量，g；

其中，所述N大于0。

2.权利要求1的方法，其中N的范围为0.01-5。

3.权利要求1的方法，其中N的范围为0.1-2。

4.权利要求1的方法，其中N的范围为0.5-1.2。

5.权利要求1的方法，其中N=1。

6.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述色谱条件为：

色谱柱：糖柱

流速：0.5ml/min

温度：80℃

流动相：超纯水

检测器：蒸发光散射检测器或者示差折光检测器。