[发明专利]一种乳制品中酵母β-葡聚糖的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测方法，特别涉及一种乳制品中酵母β-葡聚糖的检测方法，属于化学成分检测的技术领域。

背景技术

酵母β-葡聚糖是以酿酒酵母为原料，经提取、酸碱处理、喷雾干燥等步骤生产而成的新资源食品，分子量2万-400万道尔顿；分子式为(C₆H₁₂O₆)_n，n为125-25000；结构式见图1。

目前，国内尚未有酵母β-葡聚糖在乳制品中定量检测方法的国家标准和行业标准。

乳制品中的糖主要为乳糖，结构式见图2。充分水解产物为葡萄糖和半乳糖。

酵母β-葡聚糖是具有β-1,3及/β-1,6结构的葡萄糖聚合物，充分水解产物为葡萄糖。酵母β-葡聚糖不能与乳制品中胶体形成非常稳固的胶体体系，在离心过程中会沉降下来，而乳制品中乳糖、脂类不会沉降，从而使其与乳制品分离；分离后得到的酵母β-葡聚糖经过酸水解形成葡萄糖溶液；使用HPLC测定其中葡萄糖和半乳糖的含量，进而通过葡萄糖比半乳糖多出的部分计算出酵母β-葡聚糖的含量。

发明内容

本发明的目的是开发一种酵母β-葡聚糖在乳制品中定量检测的方法，其检测灵敏度高，检测准确度高，重复性好。

本发明的技术方案如下：

1.样品前处理

1.1称样

在50mL高速离心管中称取待测液体样品25.0000x N g，其中固体样品5.0000x Ng加超纯水至25.0000x N g，充分溶解；

其中液体样品指我公司或市场上的可以流动的乳制品，如：调制乳、酸牛奶、乳饮料等；固体样品指奶粉、奶酪、冰淇淋等产品。

1.2沉淀

加入5x N mL 20%乙酸锌溶液和5x N mL 10%亚铁氰化钾溶液，充分振荡混合后于5500g离心10min，去掉上清液。

1.3水洗

沉淀物加15x N mL超纯水，玻璃棒搅匀，用10x Nml超纯水冲洗玻璃棒，振荡混合均匀后，于5500g离心10min，去掉上清液。

1.4醇洗

沉淀物加15x N mL 75%乙醇，玻璃棒搅匀，用10x N mL 75%乙醇冲洗玻璃棒，震荡混合均匀后，于5500g离心10min，去掉上清液。

1.5二次水洗

沉淀物再加15x N mL超纯水，玻璃棒搅匀，用10x NmL超纯水冲洗玻璃棒，震荡混合均匀后，于5500g离心10min，去掉上清液。

2.标准品前处理

2.1称样

在250mL SCHOTT瓶中称入0.0105g（称准至0.0002g）Sigma G5011标准品。

2.2标准品预溶

加入50mL超纯水预溶。

3.葡萄糖标准曲线制备

吸取葡萄糖标液1、3、5mL到10mL容量瓶中，用超纯水定容到刻度，得到葡萄糖为20、60、100mg/L的混合标样。在色谱条件下准确进样20uL，绘制色谱峰面积和标准物质量浓度之间的标准曲线，得出回归方程。

4.半乳糖标准曲线制备

吸取半乳糖标液1、3、5mL到10mL容量瓶中，用超纯水定容到刻度，得到半乳糖为20、60、100mg/L的混合标样。在色谱条件下准确进样20uL，绘制色谱峰面积和标准物质量浓度之间的标准曲线，得出回归方程。

5.样品及标准品水解

5.1样品加酸

将1.5得到的沉淀物转入250mL SCHOTT瓶中，加入12x N mL盐酸（37%），加超纯水至150mL，振荡混匀。

5.2标准品加酸

在2.2得到的标准品溶液中，加入12mL盐酸（37%），加超纯水至150mL，振荡混匀。

5.3水解

将SCHOTT瓶放入高压灭菌锅121℃处理60min。水解完成后马上冷却。用40%氢氧化钠，将溶液调pH到6-7，然后定容至250mL。

6.色谱检测葡萄糖、半乳糖含量

可以采用但不仅限于以下色谱柱及检测器对葡萄糖、半乳糖含量进行分析。

1）糖柱：

色谱柱：糖柱（Waters Sugar-pak Ⅰ6.5 x 300mm）

流速：0.5ml/min

温度：80℃

流动相：超纯水

检测器：蒸发光散射检测器或者示差折光检测器

2）氨基色谱柱：