[发明专利]一种从鸭胆汁中分离提纯鹅去氧胆酸的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生化分离提纯，特别是涉及一种从鸭胆汁中分离提纯鹅去氧胆酸的方法。

背景技术

鹅去氧胆酸（3α,7α-二羟基-5β-胆烷酸，Chenodeoxycholic Acid，简称CDCA）具有纠正胆固醇饱和胆汁的作用。1972年由英国正式开辟了溶解胆固醇类结石的治疗，鹅去氧胆酸作为第一个纠正饱和胆汁和溶解胆石的药物被应用。现在已知在很多动物和人的胆汁、肝、肾等组织中都含有鹅去氧胆酸。

鹅去氧胆酸还可作为合成熊去氧胆酸（3α,7β-二羟基-5β-胆烷酸）和其他甾体化合物的中间体。熊去氧胆酸能促进胆汁固体成分的分泌，是一种强有力的利胆药物，用于治疗各种胆疾及消化道疾病，研究发现熊去氧胆酸能溶解X射线可透射的胆石，而且毒性小，用量少，市场前景广阔。

鹅去氧胆酸主要动物胆汁中提取，目前大多数厂家都是从鸡胆汁中和猪胆汁中提取，还缺少利用鸭胆汁中鹅去氧胆酸的工艺方法，而我国鸭养殖量巨大，可作为鹅去氧胆酸的原料的新的来源。

鸡胆汁中鹅去氧胆酸约为80%，含量高，提取简单，利用传统的溶媒提取法即可获得较高纯度（96%以上）的鹅去氧胆酸，而鸭胆汁中鹅去氧胆酸含量大约为40~50%，传统的溶媒提取法不能得到较高纯度的鹅去氧胆酸，需要针对其特点开发新的提纯方法。

发明内容

为扩大鹅去氧胆酸的原料来源，提高家禽胆汁资源的利用效率，本发明旨在提供一种从鸭胆汁中分离提纯鹅去氧胆酸的方法。

本发明提供一种从鸭胆汁中分离提纯鹅去氧胆酸的方法，具体步骤如下：

1）溶解萃取：在鸭胆膏粗品中加入萃取剂，具体为鸭胆膏粗品5倍重量的氯仿、5~20倍重量的甲醇、5~10倍重量的水，加热回流1~2小时，冷却至20~25℃，静置分层，得到氯仿相和甲醇/水相，蒸发回收甲醇，剩下的水相以质量百分含量17~20%的盐酸（用质量百分含量为38%的浓盐酸与水的体积比为1:1配得的盐酸）调pH至2，结晶，离心，得到鹅去氧胆酸A品；

2）乙酸乙酯萃取：将鹅去氧胆酸A品用5~10倍质量的氢氧化钠溶液溶解，溶液中氢氧化钠的质量百分含量为5~10%，冷却至20~25℃，加入乙酸乙酯，加入量为每克鹅去氧胆酸A品加5~10ml，调pH至7.2~7.6，分层得到乙酸乙酯相，向水层中继续加入乙酸乙酯，加入量为每克鹅去氧胆酸A品加5~10ml，调pH至6.8~7.2，分层得到乙酸乙酯相，合并两次乙酸乙酯相，加入鹅去氧胆酸A品5%重量的活性炭回流脱色1~2小时，过滤除去活性炭，蒸发回收乙酸乙酯，剩下即为鹅去氧胆酸B品；

3）超滤除杂：取鹅去氧胆酸B品溶解到10~20倍重量的水中，以过截留分子量为3K-100K的超滤膜后，用质量百分含量17~20%的盐酸调节pH至2~3，过滤干燥得到白色的鹅去氧胆酸。

其中，鸭胆膏粗品的制备方法为：新鲜的鸭胆汁，按50g/L加入氢氧化钠，煮沸24小时进行皂化，以质量百分含量38%的浓盐酸调pH至2，结晶，得到膏状物，将膏状物用10~20倍质量的乙醇溶解，加入膏状物重量10%的活性炭脱色2小时，过滤除去活性炭，蒸发回收乙醇，浓缩得到鸭胆膏粗品。

其中，鸭胆膏粗品可用同质量钙盐法制备得到的鹅去氧胆酸粗品替代。钙盐法制备得到的鹅去氧胆酸粗品的方法为：新鲜的鸭胆汁，按胆汁量50g/L加入氢氧化钠，煮沸24小时进行皂化，后加入胆汁重量5%的氯化钙，析出总胆酸钙盐沉淀，离心弃去滤液，总胆酸钙盐用40倍质量的水清洗，弃去不溶物，水溶液用用质量百分含量17~20%的盐酸调pH至2，析出鹅去氧胆酸粗品，过滤，干燥，得到鹅去氧胆酸粗品。

其中，步骤1）所述的在鸭胆膏粗品中加入萃取剂，优选为鸭胆膏粗品5倍重量的氯仿、10倍重量的甲醇、5倍重量的水；所述的加热回流，优选为2小时。

其中，步骤2）所述的将鹅去氧胆酸A品用氢氧化钠溶液溶解，优选为加入鹅去氧胆酸A品5倍质量的氢氧化钠溶液，冷却至25℃。

其中，步骤2）先后两次加入乙酸乙酯的量分别为每克鹅去氧胆酸A品的加入10ml乙酸乙酯和每克鹅去氧胆酸A品的加入5ml乙酸乙酯。

其中，步骤2）所述的调pH，优选用醋酸，先后两次分别调pH为7.5和6.8。

其中，步骤2）所述的活性碳活性炭回流脱色，回流脱色时间优选1小时。

其中，步骤3）所述的取鹅去氧胆酸B品溶解到水中，水量优选为鹅去氧胆酸B品重量的15倍。

其中，步骤3）所述的超滤膜，优选截留分子量为10K的超滤膜。

本发明的药物组合物具有以下优点：