[发明专利]一种高效鸡基因工程鸡干扰素α的制备方法

权利要求书

1.一种高效鸡基因工程鸡干扰素α的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

1）重组表达工程菌E.coli BL21(DE3)/pET22b(+)/ChIFNα种子制备：

将重组表达工程菌E.coli BL21(DE3)/pET22b(+)/ChIFNα按1%的比例接种菌液于含Amp的LB液体培养基中，振荡培养；将培养液接种至含Amp的LB平板，划线培养，挑取单菌LB中摇瓶培养，当OD_600nm＝0.5，按250ul/750ul的比例加入50%的甘油，保存；

2）工程菌E.coli BL21(DE3)/pET22b(+)/ChIFNα发酵种子液制备：

将保存的工程菌E.coli BL21(DE3)/pET22b(+)/ChIFNα种子按0.05-0.1%体积的量接种于2×YT培养液中培养，作为发酵罐用种子液；

3）工程菌E.coli BL21(DE3)/pET22b(+)/ChIFNα发酵生产：

菌体培养阶段：发酵培养基高温灭菌后，每升培养基加入100mg的Amp，按5-10%体积的量接入种子液，通气搅拌培养，培养过程调节pH7.2；

碳源饲喂阶段：碳源耗完，流加补料培养基，溶氧量维持在30％，培养过程调节pH7.2；

诱导表达阶段：继续连续流加补料培养基；加入IPTG，在IPTG终浓度0.5mM条件下诱导表达目的蛋白，培养过程中调节pH7.2，溶氧量维持在30％，诱导4h停罐；

4）重组鸡α干扰素的纯化：

取上述发酵液，5000rpm离心10min收集菌体，经PBS缓冲液洗涤后PBS缓冲液重悬，超声30min，10000rpm，4℃，离心10min收集沉淀，PBS缓冲液洗涤沉淀，然后用变性缓冲液溶解沉淀，10000rpm，4℃，离心10min，收集上清液，将上清液缓慢加入复性缓冲液中，4℃静置48h，10000rpm，4℃，离心20min，收集上清液，即得到含有高效鸡基因工程鸡干扰素α的溶液。

2.根据权利要求1所述的一种高效鸡基因工程鸡干扰素α的制备方法，其特征在于，所述步骤1）中含Amp的LB培养基中Amp的量为100μg/ml。

3.根据权利要求1所述的一种高效鸡基因工程鸡干扰素α的制备方法，其特征在于，所述步骤1）中的振荡培养条件为30℃，200rpm，培养8-10h。

4.根据权利要求1所述的一种高效鸡基因工程鸡干扰素α的制备方法，其特征在于，所述步骤1）中的保存条件为-20℃。

5.根据权利要求1所述的一种高效鸡基因工程鸡干扰素α的制备方法，其特征在于，所述步骤2）中2×YT培养液的组成为蛋白胨10.0g、酵母膏5.0g、葡萄糖1.0g、NaCl 5.0g、琼脂20.0g、蒸馏水1000ml、pH 7.0。

6.根据权利要求1所述的一种高效鸡基因工程鸡干扰素α的制备方法，其特征在于，所述步骤2）中2×YT培养液中培养条件为30℃，200rpm，培养5-12h。

7.根据权利要求1所述的一种高效鸡基因工程鸡干扰素α的制备方法，其特征在于，所述步骤3）中通气搅拌培养条件为37℃，培养8-10h。