[发明专利]鸡新城疫和H9N2亚型禽流感二联灭活疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程领域，具体涉及一种鸡新城疫和H9N2亚型禽流感二联灭活疫苗及其制备方法。

背景技术

新城疫又称亚洲鸡瘟或伪鸡瘟，具有很高的发病率和病死率，是危害养禽业的一种主要传染病，OIE将其列为A类疫病。新城疫（Newcastle disease，ND）是由新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）引起的禽的一种急性、热性、败血性和高度接触性传染病，以高热、呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血为特征。该病死亡率高，对养鸡业危害严重。1926年首先发现于印度尼西亚，不久又在英国新城发现，世界各国均有流行记载。

禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）隶属于正粘病毒科A型流感病毒属，因为该病毒是AIV负链、分节段的RNA病毒，所以该病毒很容易发生变异并不断的突破其感染宿主的种属障碍，引起新的流感流行。自1966年首次在北美的火鸡体内分离到H9N2亚型AIV以来，该亚型的病毒不断传播，目前已在全世界范围的禽群中广泛存在。我国也于1992年首次报道了鸡群中H9N2亚型AIV的感染，H9N2亚型是目前我国鸡群中存在的AIV主要亚型，占禽流感总发病率的90%以上。H9N2亚型禽流感发病后虽然致死率不高（一般不超过30%），但常导致呼吸道症状，蛋鸡的产蛋下降，并使鸡群易继发严重的呼吸道疾病，影响家禽生产性能。AIV不仅对我国的养殖业造成了严重的损失，而且对人类健康也构成了威胁。

目前新城疫、H9N2亚型禽流感严重危害家禽养殖业的发展，在各种防控措施中，疫苗的免疫仍为最重要的措施。针对新城疫、H9N2亚型禽流感，已有相应的灭活单苗及二联灭活苗，但是免疫剂量大，抗体水平低，对流行毒株的交叉免疫保护率不高，给免疫鸡群带来一定的风险。因此，研制出免疫剂量小，交叉免疫效果更好的新城疫、禽流感H9N2亚型二联苗是一项具有重要意义的工作。

发明内容

本发明的目的在于提供一种鸡新城疫和H9N2亚型禽流感二联灭活疫苗，该二联灭活疫苗中含有的H9亚型禽流感病毒HN03株，免疫原性好，产生的抗体水平高，不仅能够抵抗同源病毒攻毒，而且能够抵抗2011年以来新流行的H9N2亚型禽流感病毒SH01、H9N2亚型禽流感病毒JX02攻毒；该二联灭活疫苗能够产生高水平的抗体，持续期长。

本发明的另一目的在于提供鸡新城疫和H9N2亚型禽流感二联灭活疫苗的制备方法，该方法简单，安全。

本发明采用如下技术方法来实现发明目的：

一种鸡新城疫和H9N2亚型禽流感二联灭活疫苗，含有鸡新城疫病毒La Sota株和禽流感病毒A/chicken/He Nan/03/2009/(H9N2)株；所述禽流感病毒A/chicken/He Nan/03/2009/(H9N2)株缩写为H9N2亚型禽流感病毒HN03株，保藏号为CGMCC NO：6258。

所述鸡新城疫病毒La Sota株和H9N2亚型禽流感病毒HN03株的含量比为2: 1～3。

一种制备所述鸡新城疫和H9N2亚型禽流感二联灭活疫苗，包括如下步骤：

（1） 病毒液的制备：将鸡新城疫病毒La Sota株和H9N2亚型禽流感病毒HN03株分别接种SPF鸡胚，分别收获鸡胚液，作为鸡新城疫病毒La Sota株病毒液和H9N2亚型禽流感病毒HN03株病毒液；

（2）病毒液的浓缩与灭活：将鸡新城疫病毒La Sota株病毒液和H9N2亚型禽流感病毒HN03株病毒液分别浓缩，然后分别加入β-丙内酯获得鸡新城疫病毒La Sota株灭活病毒液和H9N2亚型禽流感病毒HN03株灭活病毒液；

（3）水相制备：将鸡新城疫病毒La Sota株灭活病毒液和H9N2亚型禽流感病毒HN03株灭活病毒液混合，获得混合病毒液；将混合病毒液与吐温-80混合，制得水相；

（4）油相制备：将注射用白油和司本－80混匀，作为油相；

（5）乳化：将水相和油相混合均匀，即得鸡新城疫和H9N2亚型禽流感二联灭活疫苗。