[发明专利]卡泊芬净前体pneumocandinB0组分的纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及卡泊芬净的合成、纯化，具体涉及卡泊芬净前体的纯化方法。 

  

背景技术

卡泊芬净（caspofungin）是第一个获准上市的棘白菌素类新型抗真菌药物，是一种半合成环状脂质化合物，相对分子量为1213.42。其前体化合物pneumocandinB₀（PB₀）是从Glarea lozoyensis中提取得到。卡泊芬净的作用靶点是真菌细胞壁的葡聚糖合酶，不同于传统的作用于真菌浆膜中麦角固醇的抗真菌药。与目前3类系统性抗真菌药物：多烯类（两性霉素B）、吡咯类(如酮康唑、氟康唑、伊曲康唑)、氟嘧啶类相比，表现出更为广泛的抗菌谱：对多数念珠菌属及其他抗真菌药耐药的真菌均有效，且抗菌活性强，耐受性好。卡泊芬净通过非竞争性抑制1.3-β-D肽聚糖合成酶而阻止真菌细胞壁的合成，从而迅速杀灭真菌，大大降低耐药菌的出现。因此，卡泊芬净是一类高效、低毒、广谱的抗真菌药物。且因其良好的药代动力学特性而可每日1次给药，故具有较好的临床应用前景。 

从pneumocandinB₀组分出发，需经数步化学反应，最终得到卡泊芬净。若PB₀纯度过低，直接会影响后面每步化学反应产物的收率，且对最终产物卡泊芬净的精制纯化带来相当大的困难，因此制备高纯度PB₀组分是卡泊芬净合成、纯化的关键。由于PB₀组分是通过微生物发酵获得，而微生物发酵产物成分较多，再加上PB₀组分结构复杂，对热、碱均不稳定，所以给制备高纯度的PB₀组分增加了难度。 

目前，已有对pneumocandinB₀组分纯化的报道，但是存在或纯化的效果不理想，或操作极其复杂，导致产品收率降低，很难实现规模化生产。 

 PneumocandinB₀组分的结构式如下： 

发明内容

本发明的目的是为了提供一种卡泊芬净前体pneumocandinB₀（PB₀）组分的纯化方法，该方法纯化效果好、操作步骤简单，可作为规模化生产高纯度PB₀组分的有效手段。 

本发明采用以下技术方案： 

一种卡泊芬净前体pneumocandinB₀组分的纯化方法，上述的纯化方法包括以下步骤：

步骤1，将PB₀组分粗品进行反相柱层析，收集并减压浓缩，得到半纯品；

步骤2，将步骤1中所得PB₀半纯品上正相柱层析，得高纯度PB₀组分，正反相液相分析，色谱纯度均大于95%。

上述的步骤1中所使用的反相层析柱为C8或C18, 反相层析柱的柱料的粒径为20～50um。 

步骤2中上述的正相柱柱料是普通正相硅胶上键合有氰基（CN），其粒径为200～300目。 

步骤1中上述的将PB₀组分粗品进行反相柱层析具体包括以下步骤： 

步骤1-1，用体积百分比为95%的乙醇装柱，再用体积百分比为45%的乙醇，该溶液同时含有体积百分比为1‰的甲酸，平衡柱子；

步骤1-2，上样；

步骤1-3，用体积百分比为50%的乙醇，该溶液同时含有体积百分比为1‰的甲酸，冲洗柱子，之后再用此溶液进行解析；

步骤1-4，分段收集，将所需收集液减压浓缩，得到半纯品。

在进行步骤1-2上样之前，需要用体积百分比为45%的乙醇溶液溶解PB₀组分粗品，溶解后样品浓度为5～10g/L，再用甲酸调pH值为3.0—4.0，然后再上样。 

上述的步骤1中反相柱层析的解析剂是体积百分比为55%—58%的乙醇，同时该溶液中含体积百分比为1‰的甲酸。 

步骤2中上述的正相柱层析采用干法上样，具体方法为：将步骤1中所得半成品与正相氰基硅胶以重量比为1:5的比例进行混合，均匀后倒入层析柱中。 

上述的步骤2中进行正相柱层析时，在上样前，先用体积比为乙酸乙酯：甲醇：水=82: 10:8的溶液平衡柱子，上样后，继续用此溶液作为解析剂进行解析。 

上述的水中含有体积比为1‰～2‰的氯化钠。 

步骤1中上述的减压浓缩温度为45～60℃。