[发明专利]肾炎清片中土大黄主要成分含量的检测方法

权利要求书

1.一种肾炎清片中大黄素、大黄酚和大黄素甲醚含量的检测方法，包括以下步骤：

1）以大黄素、大黄酚、大黄素甲醚为对照品，制成一定含量的大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的溶液，通过高效液相色谱法测定其图谱，由大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的特征吸收峰峰面积和对照品进样量绘制标准曲线；

2）将待测肾炎清片研细，加溶剂超声处理，然后过滤取滤液，制得供试品；

3）在与步骤1）相同的色谱条件下测定步骤2）制得的供试品的高效液相色谱图谱，并分别计算大黄素、大黄酚和大黄素甲醚相应特征吸收峰的峰面积，根据步骤1）绘制的标准曲线得到待测肾炎清片中大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的含量。

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤1）用80-100%甲醇溶解大黄素、大黄酚和大黄素甲醚对照品，制成大黄素浓度为6-25μg/ml、大黄酚浓度为6-25μg/ml和大黄素甲醚浓度为4-16μg/ml的对照品溶液，然后上样进行高效液相色谱。

3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤2）将肾炎清片研细后加入6-15％盐酸溶液中，超声使之溶散，再加入三氯甲烷，加热回流0.5-2小时，冷却，分液，取有机相，去除溶剂，残渣用80-100%甲醇溶解，过滤取滤液，制得供试品。

4.如权利要求3所述的检测方法，其特征在于，步骤2）取180mg研细的肾炎清片粉末加入10mL 8％盐酸溶液中，超声使之溶散，再加三氯甲烷15mL，加热回流1小时，冷却后分液，取三氯甲烷层，水相用三氯甲烷提取3次，合并三氯甲烷液，减压回收溶剂或水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，微孔滤膜滤过，即得供试品。

5.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤1）和3）中采用的高效液相色谱法是反相色谱法。

6.如权利要求5所述的检测方法，其特征在于，步骤1）和3）进行高效液相色谱的色谱条件是：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相是甲醇-(0.02~0.2％)磷酸溶液，体积比为(0.5~19):1；检测波长为210-320nm。

7.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱是Agilent SB-C₁₈柱，柱体积为4.6×250mm，粒度为5μm；流速：0.8-1.5mL/min；柱温：25-40℃。