[发明专利]肾炎清片中土大黄主要成分含量的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及中成药有效成分的检测，特别涉及肾炎清片中大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量检测方法。

背景技术

肾炎清片是由益母草、黄芪、白茅根、萹蓄、瞿麦、小蓟、石韦、地榆炭、土大黄、甘草等制成的中药复方制剂。方中君药土大黄为酸模属植物巴天酸模Rumex patientia L.的干燥根，从巴天酸模中发现的化合物主要包括蒽醌、萘及萘醌、黄酮、二苯乙烯苷和苯并呋喃酮等（朱晶晶，王峥涛，张朝凤等.酸模属植物中化学成分及其药理活性研究进展［J］.中草药，2008，39(3):450-454.），蒽醌类成分作为其主要活性成分目前分离得到的主要有大黄素、大黄酚、大黄素甲醚及其苷等（刘景，夏忠庭，周桂荣等.巴天酸模根化学成分研究［J］.中草药，2011，34(6):893-895；高黎明1，魏小梅，郑尚珍等.巴天酸模中化学成分的研究［J］.中草药，2002，33(3):207-209.）。

目前，该药材未被《中国药典》收载，仅在天津、北京等地方标准中有载，但这些地方标准大多为上世纪九十年代制定，检测手段落后，其检测方法只停留在简单的定性鉴别上，未收载可靠的含量测定方法，难以有效的控制药材质量。尤其在各级药品标准以及各文献检索中，对含土大黄制剂的含测控制方法未见研究，这样不能保证含土大黄复方制剂的安全、有效。为此，结合土大黄药材的含量测定标准建立含土大黄复方制剂的含测标准，对复方制剂的质量控制意义重大。

发明内容

本发明的目的在于提供一种简便、快速、准确的检测肾炎清片中土大黄主要有效成分含量的方法，为肾炎清片质量标准的制定提供依据。

本发明提供的肾炎清片中土大黄主要有效成分（大黄素、大黄酚和大黄素甲醚）含量的检测方法，包括以下步骤：

1）以大黄素、大黄酚、大黄素甲醚为对照品，制成一定含量的大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的溶液，通过高效液相色谱法测定其图谱，由大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的特征吸收峰峰面积和对照品进样量绘制标准曲线；

2）将待测肾炎清片研细，加溶剂超声处理，然后过滤取滤液，制得供试品；

3）在与步骤1）相同的色谱条件下测定步骤2）制得的供试品的高效液相色谱图谱，并分别计算大黄素、大黄酚和大黄素甲醚相应特征吸收峰的峰面积，根据步骤1）绘制的标准曲线得到待测肾炎清片中大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的含量。

上述步骤1）优选用80-100%甲醇溶解大黄素、大黄酚和大黄素甲醚对照品，制成大黄素浓度为6-25μg/ml、大黄酚浓度为6-25μg/ml和大黄素甲醚浓度为4-16μg/ml的对照品溶液，然后上样进行高效液相色谱。当大黄素进样量在20.52-1026ng范围内特征吸收峰峰面积与进样量呈良好的线性关系；当大黄酚进样量在17.12-856ng范围内特征吸收峰峰面积与进样量呈良好的线性关系；当大黄素甲醚进样量在11.68-584ng范围内特征吸收峰峰面积与进样量呈良好的线性关系。

上述步骤2）肾炎清片研细后加入6-15％盐酸溶液中，超声使之溶散，再加入三氯甲烷，加热回流0.5-2小时，冷却，分液，取有机相，去除溶剂，残渣用80-100%甲醇溶解，过滤取滤液。优选的，180mg研细的肾炎清片粉末加入10mL 8％盐酸溶液中，超声使之溶散，再加三氯甲烷15mL，加热回流1小时，冷却后分液，取三氯甲烷层（即有机相），水相（即酸液）用三氯甲烷提取3次，合并三氯甲烷液，减压回收溶剂或水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，微孔滤膜（优选0.45μm）滤过，即得。

上述步骤1）和3）中，所述高效液相色谱法是反相色谱法，其色谱条件是：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相是甲醇-(0.02~0.2％)磷酸溶液，体积比为(0.5~19):1；检测波长为210-320nm。在此条件下，色谱峰可以得到较好的分离，理论板数按大黄素计算应不低于3000。

上述十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱优选为Agilent SB-C₁₈柱，柱体积为4.6×250mm，粒度为5μm；流速：0.8-1.5mL/min；柱温：25-40℃；流动相：甲醇-0.1％磷酸溶液（体积比85∶15）；检测波长为254nm。

本发明采用反相色谱法对肾炎清片中的土大黄主要有效成分大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量进行测定，所提供的色谱条件可以使得色谱峰得到较好的分离，操作简便、灵敏度高，重现性好。并且，通过这些有效成分的含量了解肾炎清片在生产过程中是否达到生产要求，为肾炎清片质量标准的制定提供了依据。

附图说明