[发明专利]一种高效表达抗癌基因的受特定miRNA调控的在胶质瘤细胞中特异增殖的腺病毒及其用途

权利要求书

1.一种重组腺病毒载体，其特征在于：该病毒载体的至少一个增殖必需基因的3端非翻译区中插入至少一个微小RNA靶点的核苷酸序列，所述的微小RNA在胶质瘤细胞中表达缺失或降低而在神经元和胶质细胞中表达正常。

2.根据权利要求1所述的重组腺病毒载体，其特征在于所述微小RNA可以选自miR-124, miR-128, miR-146b and miR-218中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的重组腺病毒载体，其特征在于所述微小RNA靶点序列由一个或多个相同的微小RNA靶点序列以连续串联方式构成。

4.根据权利要求1所述的重组腺病毒载体，其特征在于所述微小RNA靶点序列由一个或多个不同的微小RNA靶点序列以连续串联或间隔串联的方式构成。

5.根据权利要求1所述的重组腺病毒载体，其特征在于所述腺病毒增殖必需基因选自腺病毒早期表达基因：E1A,E1B，E2和E4中的至少一个。

6.根据权利要求1所述的重组腺病毒载体，其特征在于所述腺病毒增殖必需基因选自腺病毒晚期表达基因。

7.根据权利要求1所述的重组腺病毒载体，其特征在于所述重组腺病毒的基因组中还可操作的连接有外源基因，所述外源基因选自抑癌基因，有抑制血管生成作用的基因，前药转化酶基因，促进细胞凋亡基因，促进细胞自噬基因，抗体基因和疫苗基因中的至少一种。

8.根据权利要求1所述的重组腺病毒载体，其特征在于所述重组腺病毒的基因组中还可操作的连接有选自缺氧反应元件、细胞S期特异性启动子、甲胎蛋白增强子及启动子、癌胚抗原增强子及启动子、酪氨酸酶增强子及启动子、尿激酶纤维蛋白激活剂增强子及启动子、ErbB2增强子及启动子、ErbB3增强子及启动子、ErbB4增强子及启动子、DF3乳腺癌相关抗原增强子、前列腺素特异性抗原增强子及启动子、腺血管舒缓素增强子及启动子、EB病毒中的Orip、EB病毒Orip中的FR增强子和EB病毒BamHⅠC-启动子中的至少一种顺式作用元件，所述顺式作用元件调控所述重组腺病毒的增殖必需基因的转录。

9.根据权利要求1所述重组腺病毒载体的构建方法，其特征在于在所述腺病毒至少一个增殖必需基因的3端非翻译区中插入至少一个微小RNA的靶点核苷酸序列，所述微小RNA在胶质瘤细胞中表达缺失或降低而在神经元和胶质细胞中表达正常。

10.根据权利要求1-8中任一项所述重组腺病毒载体的用途，其特征在于所述重组腺病毒用于选择性的在缺失或低表达相应微小RNA的胶质瘤细胞中増殖，而在正常表达该微小RNA的神经元和胶质细胞内不增殖。